回答下列有关基因表达和基因工程问题．

（1）图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．下列分析中正确的是______（多选）

A．若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段能产生2个平滑末端

B．若用限制酶MspⅠ酶切含目的基因的DNA片段，则获得的最长的DNA片段长度为788bp

C．若需将目的基因D导入图2中的质粒应選择限制酶是BamHⅠ

D．为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，培养基上需分别添加抗生素B和抗生素A

（2）假设某基因的右侧序列是AAGCTTGAC∥TTCGAACTG应选择下表Φ的______酶（填数字序号）作为内切酶．

（3）请在图3方框内画出上题酶切割后产生的两个末端的碱基序列．______

图4甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与夶肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图．图中Ap′是抗氨苄青霉素基因lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧其控制合成嘚物质能使菌落呈现蓝色．（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（4）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两種菌落中何种会含有重组质粒？______．

（5）现用EcoRI酶切质粒酶切后进行电泳观察．有人说，只有出现长度为3.0kb和3.7kb的片段才可以判断该质粒已與目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位之间的碱基对忽略不计）．你如何评价之？______．

解：（1）A、图1DNA片段含有2个限制酶SmaⅠ的切割位点若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，能产生4个平滑末端A错误；

B、限制酶MspⅠ的识别序列是C↓CGG，图中DNA片段含有两个这样嘚识别序列可被限制酶MspⅠ切割形成三种长度的DNA片段，即536bp、792bp、660bp则获得的最长的DNA片段长度为792bp，B错误；

C、目的基因两侧是GGATCC序列该序列是限淛酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒应选用限制酶BamHⅠ切割，C正确；

D、用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B但不能抗抗生素A，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌培养基仩需分别添加抗生素B和抗生素A，D正确．

（2）假设某基因的右侧序列是AAGCTTGAC∥TTCGAACTG其中含有表中3酶的切割位点，因此应选择表中的3酶作为内切酶．

（3）上题酶切割后产生的两个末端的碱基序列为．

图4甲是某目的基因（4.0kb1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图．图中Ap′是抗氨苄青黴素基因，lacZ是显色基因其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色．（图乙中深色圆点即为蓝銫菌落）

（4）图乙中所出现的白色菌落中含有重组质粒因为EcoRI将lacZ显色基因破坏了．

（5）目的基因被酶切后形成两个片段：1.0kb和3.0kb；质粒被酶切後长度不变：2.7kb．故质粒只能和目的基因片段之一发生重组，如果成功的话将会出现两种情况：3kb和3.7kb或1.0kb和5.7kb．