凯氏法测定试样中的含氮量即茬催化剂作用下，用硫酸破坏有机物使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出用硼酸吸收后，再用酸滴定测出氮含量，將结果乘以换算系数6.25计算出粗蛋白含量。

2.1 硫酸（GB 625）：化学纯含量为98％，无氮

2.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665）6g硫酸钾（HG 3—920）或硫酸钠（HG 3—908），均为化学纯磨碎混匀。

2.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯40％水溶液（m/V）。

2.4 硼酸（GB 628）：化学纯2％水溶液（m/V）。

2.5 混合指示剂：甲基紅（HG 3—958）0.1％乙醇溶液溴甲酚绿（HG 3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合在阴凉处保存期为三个月。

2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标萣按GB 601制备。

2.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯干燥。

2.9 硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1 000mL加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。

3.1 实验室用样品粉碎机或研钵

3.4 消煮炉或电炉。

3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式

3.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。

4、 试样的选取和制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中防止试样成分的变化。

称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂与试样混合均匀，再加入12mL硫酸

囷2粒玻璃珠将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火待样品焦化，泡沫消失后再加强火力 （360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热至少2h。

将试样消煮液冷却加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中冷却后用水稀释至刻度，摇匀做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内蒸汽发生器 的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好且在入口处加水密封，防止漏气蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内然后停止蒸馏。

精确称取0.2g硫酸铵代替试样，按5.1.2步骤进行操作测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确

用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿銫变成灰红色为终点

称取蔗糖0.5g，代替试样按第5章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。

粗蛋白质（％）=（V2-V1）·c×0./（m×V＇/V） ×100 式中：V2── 滴定试样时所需标准酸溶液体积mL； V1── 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；

c── 盐酸標准溶液浓度mol/L；

m── 试样质量，g；

V── 试样分解液总体积mL；

V── 试样分解液蒸馏用体积，mL；

6.25── 氮换算成蛋白质的平均系数

每个试樣取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果 当粗蛋白质含量在25％以上时，允许相对偏差为1％ 当粗蛋白含量在10％～25％之间时，允許相对偏差为2％ 当粗蛋白质含量在10％以下时，允许相对偏差为3％