因工程菌生长密度和人胰岛素表達的影响进行了研究结果表明诱导前培养温度为３０℃、诱导后为４２℃可提高胰岛素的表达量Ｉｌ¨。柴家前等认为较高的温度有利于细菌温度的高密度发酵，低温培养能提高重组产物的表达量，而且在不同培养阶段采用不同的培养温度有利于提高细菌温度的生长密度和重组产物的表达量，并可缩短培养周期。此外，一些研究表明，培养温度升高基因工程菌的质粒稳定性变差。如质粒ｐＴＧ２０１带有熙启动子调控的恶臭假单胞菌ｘｙｌＥ基因大肠杆菌Ｂ（ｐＴＧ２０１）在３１℃连续培养时比较稳定，经过８３代连续培养有超过８２％的细胞带有ｐＴＧ２０１。当在３７℃连续培养时经过８７代带有重组质粒的细胞仅占４０％；而在４２℃培养６７代，带有质粒的细胞仅为３５％ｔ１２】１．２．２．４溶解氧

溶解氧浓度是好氧微生物高密度发酵过程中影响菌体生长的重要因素之一，而且它往往会成为发酵的控制因素这主要是由于氧在水中溶解度很小所致。在细胞的对数生长期若停止供氧则发酵液中的溶解氧会在几分钟內耗尽。在发酵后期反应器中生物量很大，而且发酵液粘度增大此时受反应器供氧能力的限制，发酵液中的溶解氧浓度会低于临界氧濃度这样，氧的溶解和传递便成了该细胞反应的限制步骤Ｈｏｐｋｉｎｓ等

【１３】研究了大肠杆菌ＡＢｌｌ５７（ｐＫＮ４０１）茬分批培养中供氧的影响。在复合培养基中无论培养基是否加入氨苄青霉素，基因工程茵都比较稳定但当发酵时中断通气使溶氧降到５％，则造成基因工程菌比例迅速下降在发酵Ｏ．５ｈ停止通气后，经１．６ｈ溶氧缓慢降到５％然后恢复通气，此后丢失ｐＫＮ４０１的宿主细胞比例大大增加表明低溶氧会引起该菌株的质粒不稳定。然而在培养过程中并不是维持溶氧越高越好，即使是专性好氧菌过高的溶氧对生长也可能不利。氧的有害作用是通过形成新生氧Ｏ超氧化物基０２’和过氧化物基０２｝，或羟基自由基ＯＨ，破坏许多细胞组分来实现的

１．２．２．５诱导条件

基因工程菌的构建通常考虑采用可诱导的强启动子，这样在进行发酵时可分成两个階段即生长阶段和生产阶段，生长阶段以获得较大量的茵体为目标而在生产阶段则以获得大量重组蛋白为目标。这是由于采用强启动孓表达外源基因时外源基因的高表达会对宿主细胞的代谢带来很大的负担，从而严重影响生长和质粒稳定性

ｌａｃ启动子是一种常用嘚由乳糖或其类似物异丙基一Ｂ．Ｄ．硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达的启动子，诱导剂量可影响其调控的基因表达水平如Ｓｒｉｕｂｏｌｍａｓ等【１４Ｊ采用大肠杆菌ＤＨ５ａ（ｐＱＥＡｌｌ．）生产青霉素酰化酶，质粒ｐＱＥＡｌｌ中青霉素酰化酶基因受ｌａｃ启动子调控他们采用不同浓度ＩＰＴＧ诱导青霉素酰化酶表达，当ＩＰＴＧ浓度在０．０２５．０．１ｍｍｏｌ／Ｌ时增加ＩＰＴＧ浓度可提高重组青霉素酰化酶活性，而ＩＰＴＧ浓度在Ｏ．２ｍｍｏｌ／Ｌ和Ｏ．５ｍｍｏｌ／Ｌ时酶的活性下降。这是由于在高ＩＰＴＧ浓度下大肠杆菌内生成更多包含体。此外诱导剂ＩＰＴＧ在不同的生长时期进行诱导，对ｒｂＬＦ．Ｎ的表达具有显著性差异在对数生长初期和中期进行诱导时，ｒｂＬＦ－Ｎ最终的表达量却不高这是由于ｒｂＬＦ－Ｎ的表达造成重组大肠杆菌代谢负担【ｌ５１。因此在初期和中期进行诱导时，由于细胞生长受制于代谢压力重组大肠杆菌的生物量不高。在对数生长中后期进行诱导时能提高ｒｂＬＦ―Ｎ的表达量。