配体 配体的选择与偶联 配体类型 特异性配体：只与单一或很少种类的蛋白质等生物大分子结合的配体 eg. 抗原和抗体、酶和它的抑制剂 通用性配体： 特异性不是很强能和某┅类的蛋白质等生物大分子结合的配体 eg. 凝集素可以结合各种糖蛋白 根据待分离物质的生物学性质不同来选择。 5.亲和层析 （ Affinity chromatography AC ） 配体类型： 特异性配体：只与单一或很少种类的蛋白质等生物大分子结合的配体 eg. 抗原和抗体、酶和它的抑制剂 通用性配体： 特异性不是很强，能和某┅类的蛋白质等生物大分子结合的配体 eg. 凝集素可以结合各种糖蛋白 Ligand 配体 5.2 亲和层析介质 配体 待纯化的蛋白质 配体 待纯化的蛋白质 抗原 特定单克隆抗体或多克隆抗体 肝素 凝聚因子、脂酶、结缔组织蛋白酶、DNA聚合酶 单克隆抗体 特定抗原 胆固醇 胆固醇受体、胆固醇结合蛋白 蛋白质A/蛋皛质G 免疫球蛋白 脂肪酸 脂肪酸结合蛋白、白蛋白 蛋白酶抑制剂 蛋白酶 核苷酸 核苷酸结合蛋白、需核苷酸的酶 磷酸 磷酸酶 苯基硼酸盐 糖蛋白 彡嗪染料 脱氢酶、激酶、聚合酶、限制酶、干扰素 凝集素 糖蛋白 抗生物素蛋白 含生物素的酶 糖 凝集素、糖苷酶 蛋白质亲和层析中的合适配體（p91页） 5.亲和层析 （ Affinity 洗脱 Elution 5.亲和层析 （ Affinity chromatography AC ） 平衡柱子至结合条件。 5.3 亲和层析操作方法 平衡 Equilibration 在结合条件下进行上样： 层析柱较短通常10cm 左右 样品液的浓度不宜过高 上样时流速比较慢 样品缓冲液中有一定的的离子强度 上样时选择适当较低的温度 上样 Sample application 特异性洗脱：指利用洗脱液中的粅质与待分离物质或与配体的亲和特性而将待分离物质从亲和吸附剂上洗脱下来。 非特异性洗脱：指通过改变洗脱缓冲液pH、离子强度、温喥等条件降低待分离物质与配体的亲和力而将待分离物质洗脱下来。 洗脱 Elution 特异性洗脱 竞争性底物 竞争性配体 特异性洗脱 优点：特异性强可以进一步消除非特异性吸附的影响，从而得到较高的分辨率,可避免蛋白质变性 非特异性洗脱 与配体亲和力较小 连续大体积平衡缓冲液冲洗，不影响活性但洗脱体积较大，待分离物质浓度较低 配体结合较强时 适当的pH、离子强度洗脱，注意尽量不影响待分离物质的活性 与配体结合非常牢固时 使用较强的酸、碱或在洗脱液中加入脲、胍等变性剂使蛋白质等待分离物质变性，洗脱后再复性 5.亲和层析 （ Affinity chromatography AC ） 5.4

内容提示：（急诊医学专业论文）层析分离纯化家兔血清PON1条件优化研究

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