请设计制备禽流感病毒血凝素蛋白单抗和蛋白反应不同的详细实验方案

点击联系发帖人 时间：2019-10-10 06:35

单抗和蛋白反应不同

【摘要】：本研究通过犬肾细胞(MDCK)接种繁殖H5N1禽流感病毒用甲醛灭活以其作为免疫原滴鼻免疫BALB／C小鼠。另用鸡胚尿囊腔接种病毒并繁殖差速离心的方法纯化病毒同时用甲醛灭活，作为间接ELISA包被抗原通过细胞融合与克隆，用血凝抑制实验(HI)和间接ELISA实验方法筛选出3株能稳定分泌AIV H5亚型抗体的杂交瘤细胞株分别命名为2D5，3E4382。经血凝抑制实验腹水效价在1：160-1：640之间ELISA效价在1：25600-1：51200之间。用Ig亚类鉴定试剂经间接ELISA检测单抗和蛋白反应不同2D5，3E4属于IgG2a382属于IgGl亚類。通过交叉反应试验和反应性试验证明三株单克隆抗体具有良好的特异性将2D5腹水纯化后与提纯的鸡多抗(IgG)建立了双抗体央心抗原捕捉ELISA(AC-ELISA)方法，并对各试验参数进行优化筛选出试验最佳反应体系，通过对已知AIVH5亚型阳性抗原、已知AIV阴性抗原和AIV其他亚型抗原检测结果表明具有較高的特异性。建立的双抗体夹心ELISA方法敏感、特异、省时能够同时检测大批量样品，对大量的临床样品检测表明本方法对粪便棉拭子肝脏，鼻腔脑等具有较高的检出率。证明本方法对AIV疫情的监测有一定的指导意义是一种理想的AIV H5亚型抗原检测方法。

【学位授予单位】：延边大学
【学位授予年份】：2006

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