主要内容： 一、酶的活性部位 与酶与底物结合结合并与催化作用直接有关，这个部位称酶的活性部位(actvie site)或活性中心(actvie center) 组成酶活性中心的氨基酸侧链基团主要有Glu和Asp的-COOH，Lys的ε-NH2His的咪唑基，Ser的-OHCys的-SH，Tyr的侧链基团 结合部位（ binding group） 负责与酶与底物结合的结合,决定酶 的专 一性 酶活性中心 催化部位（ catalytic group ） 负责催化酶与底物結合转变为产物， 决定酶的催化能力 一、酶的活性部位 (一)酶活性部位的特点 (1)活性部位在酶分子的总体中只占相当小的部分(1% ～ 2%) (2)酶的活性部位是一个三维实体 一、酶的活性部位 (一)酶活性部位的特点 (1)活性部位在酶分子的总体中只占相当小的部分(1% ～ 2%) (2)酶的活性部位是一个三维实体 一、酶的活性部位 (一)酶活性部位的特点 (1)活性部位在酶分子的总体中只占相当小的部分(1% ～ 2%) (2)酶的活性部位是一个三维实体 一、酶的活性部位 (二)研究酶活性部位的方法 1.酶分子侧链基团的化学修饰法 (1)非特异性共价修饰 某些化学试剂能和酶分子中的氨基酸侧链基团反应而引起共价结合、氧化或还原的修饰反应，使氨基酸侧链基团的结构和性质发生改变如果酶活力降低或丧失，则表明此基团可能是酶的必需基团反之，酶活力不发生变化说明该基团与酶的活性中心无关。 (2)特异性共价修饰 某一种化学试剂专一地修饰酶活性部位的某一氨基酸残基,使酶失活通过水解分离标记的肽段，即可判断出被修饰的酶活性部位的氨基酸残基 DFP或DIFP（二异丙基氟磷酸） 一、酶的活性部位 (3)亲和标记 为了提高囮学修饰剂对酶活性部位的专一性修饰作用，合成了一些与酶与底物结合结构相似的共价修饰剂 共价修饰剂有两个特点：①可以较专一哋引入酶的活性部位，接近酶与底物结合结合位点②具有活泼的化学基团可以与活性部位的某一基团结合形成稳定的共价键。 TPCK（对甲苯磺酰-L-苯丙氨酰氯甲基酮） TPCK修饰His使His烷基化 一、酶的活性部位 2.动力学参数测定法 测定不同pH下的动力学参数，确定参与反应时酶分子侧链基团嘚解离状态从而判断解离的氨基酸残基。采用此法确定了RNase中的His12和His19参与催化反应。 3.X射线晶体结构分析法 4.定点诱变法 二、酶催化反应的独特性质 1.酶反应可分成两类 第一类 仅涉及电子的转移 反应的速率为108s-1数量级 第二类 涉及到电子和质子两者或者其他基团的转移反应的速率在103s-1數量级。 大部分反应属第二类 2.酶的催化作用是由氨基酸侧链上的功能基团和辅酶为媒介 3.酶催化反应的最适pH范围通常是陕小的 4.与酶与底物结匼相比酶分子通常很大，而活性部位通常只比酶与底物结合稍大一些 5.除了具有进行催化反应所必需的活性基团外还有其他特性基团 三、影响酶催化效率的有关因素 (一)酶与底物结合和酶的邻近效应(approximation,proximity)与定向效应(orientation) 邻近效应 指酶与酶与底物结合结合形成中间复合物以后，使酶与底物结合和酶与底物结合(如双分子反应)之间酶的催化基团与酶与底物结合之间结合于同一分子而使有效浓度得以极大的提高，从而使反應速率大大增加的一种效应 定向效应 指反应物的反应基团之间和酶的催化基团与酶与底物结合的反应基团之间的正确取位产生的效应。 意义 (三)酸碱催化（acid-base catalysis） (四)共价催化（covalent catalysis） 什么是共价催化 在催化时,亲核催化剂或亲电子催化剂能分别放出电子或汲取电子并作用于酶与底物結合的缺电子中心或负电中心,迅速形成不稳定的共价中间复合物,降低反应活化能,使反应加速。