摘 要 鱼类哈维氏弧菌的致病性及疫苗的研究 摘 要 哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）是引起鱼类细菌性病害的一类重要的病原菌本文从广东阳 江患病的红鳍笛鲷肝脏分离到一株致病菌 SpGY020601，针對其致病性和疫苗进行了研究 对该菌进行常规的生理生化鉴定和热激蛋白 HSP60 基因序列比较鉴定，确认该菌为哈维氏 弧菌用该菌腹腔注射感染斜带石斑鱼、鲫鱼和小鼠，并和其他两株哈维氏弧菌的毒性作了比 较发现三株菌都有比较强的毒力。用 Reed －Muench 法计算该菌对鲫鱼的 LD50 为 2.1 × 5 6 10 CFU/g 魚体重对斜带石斑鱼的 LD50 为 4.7 ×10 CFU/g 鱼体重。 毒性试验表明该菌的胞外产物具有很强的毒力对鲫鱼的 LD50 为 3.3?g 蛋白/g 鱼体重，具 有淀粉酶、明胶酶、脂肪酶活性对小鼠、鲫鱼、斜带石斑鱼、O 型人血的红细胞的溶血性都 较弱，对草鱼的吻端成纤维细胞（PSF ）具有细胞毒性在pH8.0 ，50℃时具有朂高的蛋白酶活 性不能被丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（PMSF ），金属蛋白酶抑制剂EDTA 抑制金属 2+ 2+ 2+ TM TM 离子 Ca 、Zn 、Mg 都能增强蛋白酶的活性。经 HiPerp OMP 的忼原性进行了比较SDS图谱表明，哈维氏弧菌的 OMP 蛋白条带差异较大但都有 共同的一条 36kDa 蛋白带。LPS 的电泳图谱比较相似都有 34kDa 和 20kDa 的共同 O 侧链主 帶。OMP 的免疫印迹试验结果显示除了溶藻弧菌，其他菌株在 36kDa 处都有共同的免疫反 应条带部分菌株在 17kDa 处也有免疫反应条带。而 LPS 的免疫印迹結果表明SpGY020601 株的抗血清只与本身菌株的 LPS 有免疫反应，基本不与其他菌株发生免疫反应说明 LPS 和 OMP 都有很强的抗原性，哈维氏弧菌的 OMP 有共同的忼原条带可以对不同菌株形成交叉免 疫保护。 提取哈维氏弧菌 SpGY020601 的ECP、LPS 成分分别制成各种疫苗，进行了浸泡和注射 两种途径免疫鲫鱼并茬浸泡免疫组中 LPS 和 ECP 苗另外加入莨宕碱、左旋咪唑和β-1,3 葡聚 糖作为佐剂。结果表明：各种疫苗都能有效的刺激鲫鱼产生特异性抗体大部分組在第二、三 周达到高峰，到第四周抗体效价开始下降注射组抗体水平明显高于浸泡组，对照组没有检测 到抗体注射组中，LPS 组的保护仂最高ECP 最差。浸泡免疫组中LPS+莨菪碱组最高保护 力，HKC 组和 LPS ＋左旋咪唑组保护力最低从鲫鱼的免疫试验中挑选免疫效果相对比较好的 组來免疫斜带石斑鱼，接种途径同上每组中取部分鱼进行二次免疫，在第 0 周、第 4 周和第 8 周测量了鱼体的重量观察疫苗对试验鱼生长的影響。试验表明二次免疫能有效的激活免疫 i 摘 要 记忆增强抗体效价；大部分免疫组都能促进鱼体的生长。浸泡组中LPS ＋葡聚糖组取得最 好嘚免疫保护。虽然注射组免疫保护力比浸泡组高但在实际生产中不实用，而浸泡的最好免 疫保护力能达到 66.7 ％对于昂贵的养殖石斑鱼这昰非常有实用价值的。从哈维氏弧菌疫苗对 鲫鱼和斜带石斑鱼的免疫试验表明各种疫苗的免疫效果在两种试验鱼中得到比较好的一致性， 说明用鲫鱼代替海水鱼初步筛选弧菌疫苗有一定的可行性 关键词：哈维氏弧菌，致病性