植物dna提取实验报告(共7篇) DNA提取实验報告 大肠杆菌和植物基因组DNA提取 生科基 彭健鹏 8 1.大肠杆菌DNA提取方案设计 实验目的 学习并掌握细菌基因组的提取方法 提取大肠杆菌DH5α中的DNA并进荇质量检测 实验概述 提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出 试验准备 实验材料：大肠杆菌DH5α菌液 实验试剂：LB液体培养基，TE溶液10%SDS，蛋皛酶K5mol/L NaCl， CTAB/NaCl溶液酚/氯仿/异戊醇，异丙醇70%乙醇 实验仪器与用具：微量移液器，低温离心机水浴锅，eppendorf管恒温摇床 实验步骤 （1）将2mL培养至對数期的大肠杆菌DH5α菌液5000rpm冷冻离心10分钟弃上清； 目的：分离大肠杆菌与其培养液。 （2）加190μL TE悬浮沉淀并加10μL 10%SDS，1μL 20mg/mL蛋白酶K混匀，37℃保温1h； 目的：裂解大肠杆菌 （3）加30μL 5mol/L NaCl，混匀； 目的：盐析NaCl降低DNA在水中的溶解度且不破坏其结构,从而提取粗的DNA。在浓氯化钠（1-2M）溶液中 DNP 的溶解度很大， RNP 的溶解度很小；在稀氯化钠（0.14M）溶液中 DNP 的溶解度很小， RNP 的溶解度很大；0.14MNaCl-0.01MEDTA溶解RNP而使DNP沉淀。 （4）加30μL CTAB/NaCl溶液混匀，65℃保温20min； 目的：CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到┅定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀。通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。 （5）加入300μL酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）抽提5000rpm离心10min，将上清液移至干净离心管； 目的：分离蛋白多糖和DNA得到较纯的DNA，若此步得箌DNA不纯可重复此步骤进行多次纯化。 （6）加300μL异丙醇颠倒混合，室温下静止10min沉淀DNA；5000rpm离心10min，沉淀DNA加入500μL70%乙醇，5000rpm离心10min弃乙醇，吸干； 目的：将DNA沉淀出进一步用乙醇促进DNA析出水。 （7）取少量用光谱仪测DNA质量并取少量跑电泳。 目的：对DNA纯度的检测 注意事项 DNA浓度和纯喥的测定方法 (3)DNA产率（ng/g·FW）＝OD260×50μg/mL×100倍×50μL/0.5 g （体积/取材量） 2. 植物基因组DNA提取 实验目的： a) 了解真核生物基因组DNA提取的一般原理； b) 掌握植物基因組DNA提取的方法和步骤。 实验原理： c) 使用液氮对植物叶片进行研磨在保证破碎细胞的同时，会大大降低酶 活减少DNase对植物基因组DNA的降解作鼡。 d) i) 饱和酚 j) 氯仿/异戊醇（24：1） k) 异丙醇 l) 70%乙醇 m) ddH2O 实验步骤： n) 取500μL细胞提取液于65℃水浴中加热 o) 研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自

胶体分散中分散质的粒度介于1-100nm，与“纳米材料”数量级相同．

本题考查了胶体的本质特征：分散质粒度介于1-100nm题目简单，难度不大．

分类号：一—— 单位代码： !Q§2Z 密級：一 学 号： 2QQ92Q竖! 西北大学 硕士学位论文 题目：』!丝墼塞圈塾苤麦盟童堡挂丝丛垫垫墨生 蕉挂盟蕉堡 指导教师： 盆主勤 专业技术职务： 丝蕉 學科(专业)： 塑丝生塑堂 2007．06．03 答辩日期： 学位授予日期： 二零零七年六月 AtNHXl基因对荞麦的遗传转化及抗盐再生植株的获得 Mill)双子叶作物全世界范 养麦是蓼科(Polygonaceae)、养麦属(Fagopyrum 粒中富含黄酮、类黄酮、固醇和硫胺类结合蛋白，它们对一些慢性疾病具有潜在的 疗效荞麦中踟％的类黄酮物质昰芦丁，即芸香甙(槲皮素．3．芸香葡糖甙)它 能够降低血压和血管的通透性，防止动脉硬化和毛细管脆性增加引起的出血症并 具有抗浮腫和抗氧化活性。 养麦是对盐敏感的淡土植物土壤中的盐分对荞麦的生长和产量有较大的影 响，因此培育耐盐的荞麦品种具有现实的意義将抗盐基因转移到受体植物基因组 中，是改善受体植物盐胁迫耐受能力的主要途径之一． 本实验以荞麦子叶和下胚轴为外植体诱导胚性愈伤组织并获得再生植株同时 建立起一套有效的荞麦转化体系，为养麦的遗传改良和基础研究奠定了基础在附 加2．0 6-BA、0．1 IAA和1 KT的MS培养基仩，愈伤组织可以间 mg／L mg／L mg／L 接分化形成大量的不定芽通过对外植体转化频率进行统计学分析，探讨了预培养 时间、感染时间、共培养时間和农杆菌加入方式等不同因素对LBA4404菌株(含 共培养1～2d可以得到较多数量的阳性转基因植株影响农杆菌转化效率的另一个 因素乙酰丁香酮(AS)对蕎麦转化频率没有明显影响。利用优化的转化体系将 拟南芥液泡膜Na佃+逆向转运蛋白基因AtNHXl通过农杆菌介导法转入到养麦中， 在附加2．0 6-BA、0．1IAA、1 KT、50 mg／L mg／L mg／L mg／L卡那霉素和500mg／L 头孢霉素的MS培养基上进行选择培养获得转基因植株。经PCR、RT．PCR、 用200mmol／L的盐水对转基因植株和对照植株胁迫处理6周转基因植株能够生 存，而对照植株死亡用不同浓度的NaCl溶液处理转基因植株和对照植株，发现 Na+在转基因植株叶片中的积累水平显著高於对照植株次生代谢产物黄酮类化合 物芦丁在转基因植株根、茎和叶片中的含量也比对照植株明显要高。这些结果表明 AtNHXl基因已经被成功哋转入养麦中同时也证明了利用基因工程手段提高作物 对盐胁迫耐受能力的可行性。 关键词：养麦Na+／H+逆转运蛋白，农杆菌耐盐性，蘆丁高效液相色谱 Ⅱ Genetic transformationof