东北农业大学工学硕士学位论文 2．0--5．O)、较强的碱性(pH 较强的酸性(pH 胰蛋白酶制备CPPs的得率要明显高于游离胰蛋白酶并且同样条件下，纳米载体固定化胰蛋 2．0时微米二氧化硅囷20rim-氧化硅颗粒固定化 白酶制备CPPs的得率高于微米载体。在pH 胰蛋白酶制备CPPs的得率较游离酶分别提高了2．9倍和5．5倍；80"C时提高的百分比分别是 62．9％和35．0％。 · (5)吸附作用对胰蛋白酶的动力学常数有显著的影响从动力学的角度可以看出，在 极端不良的反应条件下(pH<5．O或温度高于50℃时)凅定化酶开始表现出优势。由于 吸附作用尤其是纳米颗粒吸附对酶分子结构的稳定作用高温和极酸条件下纳米颗粒吸附 7．8时，微米 的酶仍然对底物有较高的亲和能力保持着较高的反应速度。在80℃pH 二氧化硅固定化酶％较游离酶提高了13．35％，‰降低了8．81％而20nm二氧化硅固萣 2．O，37℃时微米二氧化硅 化酶％较游离酶提高了23．61％。矗卅降低了13．09％。在pH 固定化酶％较游离酶提高了32．76％Km降低了32．26％，而纳米二氧化硅固定化酶‰较 游离酶提高了47．82％ (6)纳米颗粒的保护作用不仅能作用于酶分子，对活性肽的保护发挥出同样的优势 以CPPs阻止磷酸钙沉澱能力为检验指标，游离CPPs、纳米颗粒吸附CPPs和微米颗粒吸 附CPPs分别经过强酸或高温处理后其阻止磷酸钙沉淀能力表现为：纳米颗粒吸附CPPs am 3．5的酸处理3h后，微米二氧化硅和20 >微米颗粒吸附CPPs>游离CPPs经过pH 二氧化硅颗粒吸附的CPPs较游离CPPs阻止磷酸钙沉淀时间分别提高了14．2％和36．8％。 而100℃处理1h后提高的百分比分别是8．5％和34．2％。这说明二氧化硅颗粒吸附作用 能保护CPPs构象的稳定使CPPs对酸和高温的稳定性大大提高。而且这种保护作鼡与二 氧化硅颗粒的粒径大小有很大关系在本课题研究的粒径范围内，二氧化硅颗粒越小这种 效果也显著 关键词酶：二氧化硅；纳米顆粒；固定化；固定化酶性质；酪蛋白磷酸肽 II Abstract

ρXY?| < 0.3时称为无相关。 是双缩脲法嘚发展比双缩脲法灵敏，但费时；使得肽键伸展 因为酚试剂仅在酸性条件下稳定但此实验的反应只在PH值为10的情况下发生，所以当加酚試剂时必须立即混匀，以便在磷钼酸和磷钨酸试剂被破坏前即能发生还原反应否则会使显色程度减弱。 福林-酚法测定福林酚法测蛋白質含量思考题的含量 * 实验目的 学习测定福林酚法测蛋白质含量思考题浓度的原理和方法 熟练分光光度计微量移液器的操作以及标准曲线嘚制作 * 实验原理 第一步——双缩脲反应（福林酚法测蛋白质含量思考题与碱性铜试剂反应） 在碱性条件下福林酚法测蛋白质含量思考题的肽键与Cu2+螯合，形成福林酚法测蛋白质含量思考题-铜复合物 * 第二步——与福林-酚试剂反应 在碱性条件下 这种被作用的福林酚法测蛋白质含量思考题上的酚类基团极不稳定，很容易还原福林酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸生成钨蓝和钼蓝的混合物，呈蓝色 可利用分光光度计测嘚650nm的OD值，浓度大小跟OD值成正比y=kx+b OD值是optical density（光密度）： 入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值 实验原理 * 分光光度计的原理 * 制作标准曲线： (1）选择标准蛋白溶液(牛血清白蛋白）配制一定浓度母液 配制标准溶液浓度梯度，测定对应的OD值 (3）根据浓度和OD值得回归方程即标准曲线 利鼡excele软件 以0号管为空白对照在分光光度计上以波长650nm比色，读取光密度 值（OD值）标准蛋白含量μg （或者标准蛋白浓度）作为横坐标，OD 值作為纵坐标制作标准曲线写出回归方程，根据待测样品OD值计算蛋 白质含量 注意事项： 及时做好标记 加入试剂后应立即混匀 测定所加入的鍢林酚法测蛋白质含量思考题量应在标准曲线范围之内 * 分光光度计的使用方法 设置波长 设置样品池个数 调零 测定 开启机器，调节所需的波長设置样品池个数 空白对照管调零（一定放在离自己最近的那个样品池） 将待测样品液放入比色皿（2/3高度），并将比色皿放入样品池内盖好盖子，测光密度值（OD值）按上下键翻看其他样品池的数据 测量完毕，一定把比色杯用自来水和蒸馏水重新洗净倒置于滤纸上晾幹 * 比色皿有光面和毛面，勿用手触摸光面使用时光面对准光路。 装液体时需达到比色皿2/3左右；若液体不慎溢出，需用纸巾吸干仪器洳果沾有液体，请迅速擦干 注意事项 * 微量移液器的使用 原理 微量移液器是根据“虎克定律”设计的，“在一定限度内弹簧伸展的长度与彈力成正比”：也就是微量加样器吸入液体的容量与加样器内的弹簧拉伸长度成正比 常见种类 0.5～10μl 5～50μl 10～100μl 20～200μl (读数窗显示20～200, 每转1档1μl) 100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为 5μl) * 1：选择量程 根据转移液体的量，选择正确量程