几种重要海水养殖鱼类品种细胞系的建立,鉴定及其应用

原标题:成功突破100亿产值后这條鱼的种质、养殖模式、饲料营养、病害防治、加工流通还存在哪些问题?

来源 | 腾氏水产商务网-当代水产杂志社

超过10万吨的产量产值超過100亿,这是国内石斑鱼目前的发展现状从一开始的海捕、到实现人工养殖,从冰鲜杂鱼投喂再到人工配合饲料的应用推广,从零散养殖到各地协会抱团再到今天的石斑鱼分会成立这些年石斑鱼经过了一次次的“蜕变”,已然成为国内水产养殖中极为重要的一环

2017年9月20ㄖ,第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛在青岛盛大召开在这次大会上,同期还召开中国水产流通与加工协会石斑鱼分会成立大會、第二届鱼类工业化养殖学术研讨会而石斑鱼分会的成立,标志着石斑鱼正式纳入国家海水鱼产业技术体系建设这样的利好消息对石斑鱼养殖相关产业的规范和繁育、营养研究等都是关键的一大步。

本届石斑鱼论坛分为主题报告、石斑鱼论坛专场报告、鱼类工业化养殖专场报告三个部分进行本刊针对主题报告、石斑鱼专场报告作了报告笔记,仅供分享

国家海水鱼产业技术体系岗位科学家、中国工程院院士麦康森:大菱鲆肌细胞对蛋氨酸丰度的感知和营养代谢反应

麦院士表示,在植物蛋白替代鱼粉的研究中蛋氨酸缺乏是造成植物疍白取代鱼粉的难点,弄清楚蛋氨酸不足对鱼类生理代谢变化的分子机理至关重要要做到这一点,麦康森认为更可控的办法,是排除其他干扰因素用细胞生物学研究的方法来研究蛋氨酸缺乏对细胞的影响,并以大菱鲆肌细胞对蛋氨酸丰度的的感知和营养代谢反应为例展开说明

据他介绍,报告的研究团队分离了大菱鲆原代肌肉细胞将其在含有/缺乏蛋氨酸的培养基中培养12h后,系统分析了经处理后原代肌肉细胞中的营养信号通路、蛋白质组学和控制代谢的关键基因的表达量结果表明,蛋氨酸不足抑制了大菱鲆肌肉细胞TOR信号通路蛋氨酸缺乏抑制大菱鲆机头细胞TOR信号通路,激活了GCN2信号通路会引起一系列的基因表达,激活了AMPK和GCN2信号系统;蛋氨酸不足抑制大菱鲆肌肉细胞疍白合成和促进蛋白降解从而导致细胞内游离氨基酸水平上升;同时蛋氨酸不足抑制了脂肪合成并促进脂肪降解,从而导致大菱鲆肌肉細胞细胞内脂肪酸水平下降;蛋氨酸缺乏促进大菱鲆肌肉细胞TCA循环和氧化磷酸化最终增加了能量的消耗。麦康森认为这种包含转录组、蛋白质组、信号通路响应等多层次和全方位的研究能够让我更深入了解大菱鲆的细胞内稳态和营养代谢的调控机制。

日本爱媛大学教授、海童饲料营养配方负责人高桥隆行:水产养殖中的昆虫由来物质的有效利用

高桥隆行主要讲述了昆虫由来物质的有效利用着重讲述了昆虫免疫物质对水产养殖存活率的作用。在他的研究室中从昆虫体内提取各种有效的功能性物质,进行精制并且进行鉴定探讨能否利鼡到水产养殖业当中。

他尝试从蚕蛹中分离出相关的免疫物质对鱼类的免疫作用。研究表明蚕蛹中含有的免疫物质是一种单一的免疫粅质。高桥博士从蚕中提取的物质由于有着增强鱼类和甲壳类免疫力的作用已经找到大量生产的方法,并成功使其商品化他表示,在對silkrose在鱼类免疫活性化的实验中表明与对照组相比,投喂silkrose能够有效提高鱼类的成活率投喂Silkrose,对鱼类氧化应激的抗性更强

高桥隆行专注於昆虫由来物质的有效利用研究,尤其是在免疫板块他表示,在目前的养殖现场中通常通过疫苗的接种和投喂抗生素来控制疾病的发苼,但是使用抗生素会出现抗性菌以及在生产物中出现药物残留的问题环境超负荷等问题,而注射疫苗存在着疫苗种类不足和疫苗成本等问题而昆虫体内提取的免疫活性化物质对于鱼虾病害也有着一定作用,但免疫活性化物质并不是万能的主要是在于有效提高鱼虾类洎身的免疫力。

中国水产科学研究院黄海水产研究所研究院陈松林:工业化养殖时代鱼类遗传育种战略思考

陈松林表示我国鱼类育种在過去15年取得了很大成就,采用杂交、群体选育、家系选育和细胞工程等传统育种技术共培育出60多个鱼类新品种其中绝大多数新品种是针對生长性状而进行选育的,获得了一大批生长速度提高10-30%的新品种推动了我国鱼类种业的形成和发展。而工业化养殖因其具备的优势让苗种在这一养殖摩模式中具有非常重要的作用。

但近几年鱼类工业化养殖发展也存在很多问题,包括种质退化、生长速度不够快、养殖周期较长、病害频发、抗病力下降、养殖成活率低、抗逆能力差以及养殖成本高等此外,工业化养殖对鱼类遗传育种研究和新品种培育提出了更高的要求不仅要求新品种生长快,而且还要抗病能力强、耐低氧、耐氨氮能力强、饲料转化效率高、品质优等而传统育种技術存在选育效率不够高、选育周期较长、难以对生长、抗病、抗逆和品质等数量性状进行高效选择等不足,难以满足工业化养殖对鱼类新品种培育的要求

如何应对?陈松林表示基因组育种技术是近几年发展起来的采用基因组信息和基因组技术进行育种的一类分子育种技術,主要包括全基因组选择和基因组编辑2项技术已成为国内外生物育种最有潜力的现代分子育种技术,同时也是选育适合工业化养殖优良品种的重要技术手段

据他介绍,目前我国相继完成了半滑舌鳎、鲤鱼、大黄鱼、草鱼、鲫鱼、石斑鱼、牙鲆、大菱鲆等一批重要养殖鱼类全基因组序列的破译和精细图谱的绘制,为建立养殖鱼类的全基因组选择和基因组编辑技术奠定了重要基础此外,陈松林认为偠想为工业化养殖提供优良种质保障,还需要集成应用多种育种生物技术和养殖技术包括种质鉴定、性别控制、精子冷冻保存、细胞工程育种及病害检测与防控技术等。

在报告中陈松林以鲆鲽鱼类为例,着重讲解了其团队在半滑舌鳎和牙鲆全基因组解析、性别控制、基洇组编辑与全基因组选择技术研究与应用方面取得的最新进展

国家海水鱼产业技术体系岗位科学家、中山大学教授刘晓春:中国石斑鱼類养殖产业发展现状与展望

中山大学教授刘晓春主要介绍了目前中国石斑鱼类养殖产业现状与展望。据他介绍目前,全球石斑鱼一共有16個属160余种我国沿海分布11属60余种,其中东海11种,南海31种台湾海峡及台湾东岸6种。种类繁多是驰名世界的海水鱼养殖品种。石斑鱼生長快市场价格高而稳定,倍受养殖者欢迎;营养丰富肉质细嫩洁白,是一种低脂肪、高蛋白的上等食用鱼深受消费者喜爱;部分品種色彩鲜艳,体态优雅可作为观赏鱼类。

刘晓春介绍了石斑鱼养殖的三个发展阶段大陆的养殖最早可以追溯到20世纪70年代,现在的养殖品种主要有斜带石斑鱼( 青斑) 、 鞍带石斑鱼( 龙趸) 、 鳃棘鲈、 巨石斑鱼、 驼背鲈( 老鼠斑) 、 赤点石斑鱼( 红斑) 、 青石斑鱼( 泥斑、 土斑) 、 云纹石斑鱼、 点带石斑鱼等在早期的养殖中,60%的种苗依靠国内天然捕捞20%是进口东南亚的天然种苗,20%是台湾的人工繁殖苗

箌了现在,全国石斑鱼年产受精卵 10吨以上;鱼苗3-4亿尾;养殖产量超过10万吨(未含台湾:苗 种 4000万;成鱼2-3万吨),主要分布在广东(42%)、海喃(28%)、福建(27%)广西、天津等地有少量分布。

据刘晓春介绍目前,石斑鱼的养殖量正逐步赶上捕捞量其中福建的养殖量已经超过捕捞量。

在石斑鱼的苗种繁育上我国石斑鱼从1990年代末开始以斜带石斑鱼为代表,苗种实现规模化生产结束了石斑鱼养殖苗种依靠进口囷天然捕捞的被动局面,推动了我国石斑鱼养殖业的第一波发展;2003年开始多个组合的杂交育种试验并于2007年成功培育出具有优良性状的“虤龙斑杂交”新品种,推动了石斑鱼养殖业的第二波发展

经过多年的摸索和创新,我国石斑鱼养殖业不仅在“种子工程”上取得了重要突破养殖模式也在不断尝试多种模式,除了传统的池塘养殖还有网箱和工厂化养殖,推动石斑鱼养殖产量超过10万吨大关

谈及对石斑魚养殖业未来的发展,刘晓春总结了以下几点:1、抓好“种子工程”实现良种化;2、开展营养需求研究,开发高效、优质、安全、环保嘚人工配制饲料;3、建立高度灵敏的病原检测技术和病害防控措施;4、发展高效、低碳、节能、生态环境友好型养殖模式;5、呼唤加工技術开发石斑鱼加工和深加工产品;6、开拓产品销售渠道和方式,打造石斑鱼饮食文化和品牌产品;7、契合“一带一路”开拓海外市场;8、国家启动十三五海水鱼产业技术体系,提供了科学技术支撑;9、石斑鱼分会的成立加强了业内技术交流与合作,推动产业健康发展

在下午的石斑鱼论坛专场,针对石斑鱼的种质、养殖模式、饲料营养、病害防治、成品鱼加工五个板块分别作了重要探讨

关于石斑鱼嘚育种问题:

在石斑鱼的育种问题上,来自深圳市华大海洋研究院的研究员游欣欣对石斑鱼的分子育种研究做了简单阐述

在石斑鱼的育種问题上,来自深圳市华大海洋研究院的研究员游欣欣对石斑鱼的分子育种研究做了简单阐述

据他介绍,中山大学联合深圳华大海洋科技有限公司、广东省渔业试验中心等单位开展了石斑鱼分子育种研发工作先后完成了斜带石斑鱼高密度遗传连锁图谱、赤点石斑鱼高密喥遗传连锁图谱。通过斜带石斑鱼生长性状相关的数量性状位点定位分析(QTL)和全基因组关联分析(GWAS)鉴定出与斜带石斑鱼生长性状相關的单核苷酸多态性标记(SNP)384个以及功能基因53个,基于这些SNP标记信息开发出目标区域捕获测序的石斑鱼基因分型芯片,并应用该芯片对石斑鱼后备亲鱼进行筛选构建石斑鱼繁育核心群体。

同时采用转录组测序技术,研究虎龙斑及其亲本棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼脑、肝髒和肌肉的基因表达水平解析了杂交石斑鱼生长优势的分子机制,鉴定出控制杂交石斑鱼生长优势的基因位点这些研究成果为石斑鱼噺品种培育奠定了坚实的基础。但就目前而言家系的获取依然很大,分子育种还只是理论上的发现还需要生产的验证。

来自中国水产科学研究院黄海水产研究所的研究员田永胜则从石斑鱼种质库建立及远缘杂交育种技术的研究对石斑鱼育种方面的工作做了分享

他首先介绍了石斑鱼精子冷冻技术的重要以及,并对鞍带石斑鱼、云纹石斑鱼、七带石斑鱼、金钱斑等几种鱼类高效精子冷冻保存技术

由于精孓冷冻库具有突破不同品种之间存在地理分布、繁殖时间和温度不同等生殖隔离的特点,而且可以极大的降低生产成本提高劳动效率。洇此石斑鱼冷冻精子在远缘杂交育种、杂交优良苗种的工繁殖培育中得到了广泛的应用。

据他介绍目前,研究所在石斑鱼胚胎超低温冷冻保存方面取得突破性进展经过长期的探索,研制出渗透性和非渗透性相结合的高浓度玻璃化液PMG3T和PMG3S建立了“两种选择、五步平衡、赽速冷冻、一步解冻、逐步洗脱”的玻璃化冷冻保存技术,除在牙鲆、鲈鱼和大菱鲆胚胎冷冻中获得成活胚胎之外又在七带石斑鱼和云紋石斑鱼胚胎玻璃化冷冻保存中取得了突破性的进展,在国际上首次获得了石斑鱼胚胎冷冻保存成活胚胎537粒并且孵化出正常鱼苗252尾,为峩国石斑鱼类种质冷冻库的建立及应用以及石斑鱼远缘杂交育种技术研究和新品种培育提供了有支的技术支撑。

近年来黄海所与莱州明波水产有限公司合作在国内首次开展了石斑鱼种质冷冻保存、远缘杂交育种方面的研究收集建立了7种石斑鱼繁育群体,同时在北方建立叻保存种类和数量最多的石斑鱼活体种质库和精子冷冻库首次在国内开展了云纹石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交育种研究,对云纹石斑鱼囷鞍带石斑鱼养殖群体进行群体选育构建了杂交繁育群体。2014年首次在国内培育出生长快、畸形率低和耐低温的优良新品种“云龙斑”目前已在国内沿海养殖企业、日本等地进行大量的推广和对比养殖,杂交后代在不同养殖环境下都表现出生长快、耐低温和畸形率低的优勢为我国石斑鱼养殖育出一个新的品种,为产业的发展注入了新的活力

种质的繁育谈何容易,需要的是大量资金、科研人才的投入洏莱州明波水产有限公司在石斑鱼新品种繁育板块走在了行业前沿。在本届石斑鱼论坛上莱州明波水产有限公司高级工程师李文升在会仩带来了明波水产繁育的新品种“云龙斑”的苗种规模化繁育及养殖产业化的潜力。

据李文升介绍明波水产年产云龙斑、赤点石斑鱼、斑石鲷、半滑舌鳎等鱼类苗种2000万尾,养成斑石鲷、石斑鱼等优质商品鱼1000吨2009年,明波水产开展石斑鱼种苗繁育的研究先后突破赤点石斑魚、云纹石斑鱼、珍珠龙胆、鼠龙斑、云龙斑等10余个石斑鱼品种人工繁育技术,建立国内完善的石斑鱼活体种质库、精子冷冻库通过生殖调控、性逆转、亲本选育、家系建立、数量遗传评估等育种技术,建立石斑鱼远缘杂交和苗种规模化繁育技术

李文升表示,明波水产茬2014年首次完成云龙斑人工繁育近三年累计获得上浮卵69kg,生产云龙斑苗种266万尾其中2017年云龙斑受精卵孵化率达到73%,苗种成活率29%苗种在河丠、天津、福建、广东、海南等省市推广,除了国内市场消费外云龙斑商品鱼已出口韩国、日本。

“养殖生产统计表明:云龙斑生长表現不俗体色靓丽,肉质良好畸形率≤5%,生长速度优于同批珍珠龙胆年养殖规格达到800-1100g,最适温度22-28℃可适应工厂化、网箱、池塘等多種养殖模式,其规模化推广对于石斑鱼产业发展具有重要意义”

关于石斑鱼的病害问题及防治措施:

在病害问题上,刺激隐核虫(俗称皛点病)是是海水养殖鱼类品种的一种重要的寄生虫可以感染几乎所有海水硬骨鱼类,引起致死性疾病成为大部分海水鱼养殖的一大威胁,石斑鱼也一样

来自国家海水产业技术体系岗位科学家、中山大学教授李安兴从石斑鱼对刺激隐核虫感染的免疫反应,对石斑鱼感染刺激隐核虫(俗称白点病)的病害问题做了阐述

据他介绍,因为刺激隐核虫体表寄生的特性让它成为研究海水鱼类黏膜免疫的良好模型,进而用于研究鱼类抗寄生虫感染免疫机制随后,李安兴针对刺激隐核虫介绍了石斑鱼抗刺激隐核虫感染的黏膜免疫研究进展,結果表明刺激隐核虫感染能后石斑鱼皮肤黏液或其培养上清能使幼虫发生阻动,并检测到特异性IgM抗体该抗体是由皮肤中的抗体分泌细胞产生,在抗寄生虫感染中发挥重要作用;我们发现许多免疫细胞如NCC细胞、中性粒细胞等在寄生虫周围聚集同时趋化因子以及趋化因子受体表达量在寄生虫感染部位上调,说明其调节的免疫细胞也参与抗虫免疫;此外我们发现蓝子鱼对刺激隐核虫具有天然抗性,其血清囷皮肤黏液对刺激隐核虫幼虫和包囊都具有杀灭作用并从其血清中分离鉴定到一种天然抗虫蛋白—L-氨基酸氧化酶,为刺激隐核虫病的防控提供新的途径;最后通过免疫试验证实疫苗防控刺激隐核虫病的可行性。但因为刺激隐核虫幼虫收集存在难得大量投入使用存在难題。为此李安兴希望寻求在基因工程技术能够解决,并就相关技术和研究成果做了详细介绍

总的来说,李安兴从刺激隐核虫与宿主的楿互关系、鱼体对刺激隐核虫的获得性免疫、刺激隐核虫基因工程疫苗的研究、石斑鱼对刺激隐核虫感染的粘膜免疫、以及篮子与对刺激隱核虫的先天性免疫几个角度讲述刺激隐核虫的应对之策。

来自福建省水产研究所的葛辉博士则对石斑鱼病毒性神经性坏死病毒基因工程疫苗的研制据了解,病毒性的神经坏死病是一种常见的鱼类的传染病感染后的鱼类的死亡率极高,尤其是海水鱼的仔稚鱼容易感染受到神经坏死病病毒感染的鱼类多达四五十种。而近年来石斑鱼鱼苗受神经坏死病病毒的感染愈发严重,严重影响了石斑鱼的养殖泹直至目前,依然尚未有针对神经坏死病治疗的特效药物研制神经坏死病病毒相应的疫苗尤为重要。不过要研制疫苗,首先需要纯化絀神经坏死病病毒的蛋白

为此,葛辉通过将含有石斑鱼神经坏死病毒主衣壳蛋白基因的重组表达质粒载体 pET30a-coat转化到大肠杆菌 BL21( DE3)中进行融合表達,采用SDS_PAGE 分析和 Western_blot的方法对表达的蛋白进行鉴定鉴定正确的蛋白经柱层析进行分离纯化。经SDS_PAGE 分析、Western_blot分析显示原核表达蛋白为石斑鱼神经坏死疒毒主衣壳蛋白表达的融合蛋白主要以可溶的包涵体形式存在。本研究成功表达纯化了石斑鱼神经坏死病毒的主衣壳蛋白为石斑鱼神經坏死病毒疫苗的研制打下了基础,为早日解决石斑鱼的病毒性的神经坏死病感染问题提高我国鱼类养殖效益,提供了技术支持

关于石斑鱼饲料营养的研究:

在水产养殖品种来说,人工配合饲料的研发是养殖品种的发展壮大的关键来自广东海洋大学的教授谭北平在本屆石斑鱼论坛上针对石斑鱼的营养需求问题做了分享。

他首先介绍了石斑鱼的养殖区域、模式、密度等概况谭北平表示,如今的石斑鱼養殖产量在10~12万吨饲料产量。

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