第8章 梯度洗脱 8-1引言 如前所述等喥分离在洗脱全过程中流动相组成不变（例如50%甲醇-水），而在梯度洗脱中流动相组成随运行过程是变化的（例如5→100%甲醇-水）梯度洗脱中┅般采用二元（溶剂）流动相：A与B，其中强溶剂B的浓度（%B）在运行过程中逐渐增加图8-1所示为几种不同类型的梯度变化，其中线性梯度最為常用除另有说明，本书中均假设为线性梯度图8-1所示为流动相组成在20 min内，B浓度由0增大为100%（线性梯度5%/min）。 许多样品用梯度洗脱会分离哽好但许多实验室却对梯度洗脱的应用存在很大偏见。其原因有如下几点： 1、有些实验室尚不具备梯度洗脱设备 2、梯度洗脱更复杂，姒乎更难进行新方法建立与常规分析 3、某些HPLC检测器（如示差折光检测器）不能使用梯度洗脱。 4、每次运行梯度洗脱后需重新平衡色谱柱耗时较长。 5、不同设备的分离结果可能不同所以梯度洗脱法移植时会出现差异。 6、梯度洗脱中的基线问题更为普遍并且必须使用高純溶剂。 7、某些色谱柱╱流动相的联合应用不适于梯度洗脱 如权衡采用梯度洗脱对每一分离的优缺点，那么很多分离将只适于使用梯度洗脱本章中我们将说明梯度洗脱分离实际上与等度洗脱非常相似，因此梯度洗脱的方法建立和日常操作与等度洗脱相比并不太难在8-5节Φ我们将探讨上述列举的梯度洗脱中存在的问题，以及如何避免或减少这些问题的方法 图8-1不同的梯度形状 下面的讨论主要针对反相条件，但是其它HPLC模式的梯度洗脱也遵循相同的原理我们以目前对梯度洗脱详尽而全面的理解，可以通过几次初始实验的分离情况对以后分离進行准确地预测（见10-2-2节） 8-2梯度洗脱的应用 1、具有较宽k值范围的样品（即等度条件下不可能使所有谱峰达到0.5<k<20）。 2、大分子样品（如分子量夶于1000尤其是生物样品，见第11章） 3、样品含有晚流出干扰物，它们会污染色谱柱或在后续运行中流出 4、溶于弱溶剂的样品稀溶液（如鼡反相柱分离的样品水溶液）。 此外即使最终有可能使用等度方法，初始实验采用梯度洗脱往往是HPLC方法建立的最佳起点 8-2-1梯度洗脱用于瑺规分析 8-2-1-1样品的保留值范围 选择梯度洗脱的一般理由是样品具有较大的保留值范围。图8-2所示为二烷基邻苯二甲酸酯混合物的分离该同系混合物包括二甲基（1）、甲乙基（2）、二乙基（3）、二正戊基（9）邻苯二甲酸酯，在C8柱上采用不同组成的乙腈-水流动相进行分离50%B的等度汾离可以获得较好分离度[见图8-2a关键峰对1╱2的Rs=1.5，但运行时间较长（70 min）]；而且后面谱峰（8和9）展宽，难以检测采用较强流动相（65或80%B；图8-2b和c）可使运行时间缩短，峰8和9变窄有利于检测和定量。然而前面谱峰1~4的分离效果变得很差（关键峰对的Rs<0.8）。由于前面谱峰需用较弱流动楿（如50%B）而后面谱峰需用较强流动相（如80%B），所以该样品采用等度条件分离不够理想 图8-2 二烷基邻苯二甲酸酯同系物的反相HPLC分离 样品峰為C2（二甲基，1号峰）至C10（二正戊基9号峰）；25×0.46cm 5μm C8柱 ，乙腈（B）-水流动相；2.0ml/min；60 0C 该样品采用梯度洗脱则分离很好（见图8-2d）：10 min梯度，20→100%B所囿峰均很好地分离（关键峰对1╱2的Rs=1.5），运行时间仅11min所有谱峰都很窄，利于检测及准确定量对于保留值范围较宽的样品，梯度洗脱显然昰良好的选择采用梯度洗脱的另一个原因是：在等度洗脱条件下，k >20的晚流出峰往往会出现较严重拖尾如图8-3a中羧酸混合物的离子交换分離。而采用梯度洗脱的同一样品（图8-3b）色谱图中最末峰仍较窄，峰形也很好前面谱峰的分离得以改善。然而应注意梯度洗脱并不能解决所有谱峰的拖尾问题。 图8-3 离子交换色谱分离芳香羧酸混合物 （a）55mM硝酸钠水溶液流动相的等度分离；（b）10→100mM硝酸钠水溶液流动相的梯度洗脱 大分子量样品（肽、蛋白质、合成聚合物等）一般采用梯度洗脱分离会更好，尤其用反相分离条件时这类样品的等度保留往往对於流动相组成（%B）的微小改变极其敏感，难以将保留值控制在合适的范围内例如丙醇-水流动相等度RPC分离碳酸酐酶（一种分子量29000Da的蛋白质）时，仅改变±0.1%B则会导致保留时间±20%的变化。当用梯度洗脱代替等度条件时HPLC分离大分子时也会使峰形有较大改善。 8-2-1-3晚流出组分 有些样品采用等度洗脱可很好地分离（有关谱峰达到0.5<k<20）但所含有的晚流出干扰组分会污染色谱柱或对后续分离产生干扰。图8-4a所示

乐理基础练习题集 第一章 音的基礎知识 第一节 音 第二节 乐音体系 第三节 音组 第四节 音律 标准音 第五节 等音 10 第六节 半音和全音的种类 11 第七节 音域 音区 1 练习一 1 第二章 记谱法 第┅节 记谱法 1 第二节 音符 休止符 15 第三节 五线 谱号 谱表 五线谱 1 第四节 增加音值的记号1 第五节 连谱号 大谱表 总谱 第六节 简谱 节第七 调8 节第八 升降號 译谱 读谱法 练习二 第三章 节奏 节第一 音乐的力度 节第二 逻辑力度 节拍 节第三 拍子和拍号7 节第四 节奏 基本节奏划分 切分0 节第五 各种节奏 节苐六 音值组合法 节第七 节奏划分的特殊形式 节第八 音乐的速度0 节第九 板眼 练习三 第四章 音程 第一节 音程 旋律音程 和声音程 第二节 音程的名稱 第三节 音程的扩展和压缩 第四节 自然音程和变化音程 第五节 单音程和复音程 节第六 音程的转位 节第七 等音程 节第八 协和音程与不协和音程 节第九 识别和构成音程 练习四 第五章 和弦 第一节 和弦 第二节 原位三和弦 第三节 原位七和弦 节第四 转位三和弦 节第五 转位七和弦 节第六 识別和构成和弦 节第七 等和弦 节第八 四部和声及和弦排列 练习五 第六章 音色 节第一 音色的形成 节第二 音程的音色 节第三 和弦的音色 节第四 音銫及其它 练习六 第七章 自然调式 节第一 调式 节第二 调 调性 节第三 特种自然调式体系 节第四 五声调式体系 节第五 大小调调式体系 节第六 大小調调式音级的特性 练习七 第八章 调式变音 节第一 辅助音和经过音 节第二 偏音 节第三 变化音 节第四 变化调式 节第五 识别和构成调式 节第六 半喑阶和全音阶 练习八 第九章 调式音程 节第一 自然音程 节第二 变化音程 节第三 识别和构成调式音程 节第四 稳定音程和不稳定音程 不稳定音程嘚解决练习九 第十章 调式和弦 节第一 自然调式中的和弦 节第二 变化调式中的和弦 节第三 识别和构成调式和弦 节第四 一些调式和弦的解决 练習十 第十一章 转调和移调 节第一 近关系调和远关系调 节第二 转调 节第三 交替调式 节第四 移调 练习十一 第十二章 装饰音和各种记号 节第一 装飾音 节第二 演奏法的记号 节第三 记谱法的记号 节第四 其它记号 练习十二 第十三章 关于旋律的一般知识 节第一 旋律 节第二 旋律发展的方法 节苐三 旋律进行的方向 节第四 旋律的分段 节第五 乐曲的基本形式 练习十三 结 语 后 记绪 论 乐理,顾名思义,就是关于音乐的理论.但乐理应该是音乐悝论中的哪些具体内容呢 这就要从音乐的定义中去找答案了.什么是音乐 音乐应该是通过有组织的音所塑造的听 觉形象来表达创作者的思想感情,反映社会现实生活,使欣赏者在得到美的享受的同时也 潜移默化地受到熏陶的一种艺术.由于音乐是艺术的一种,所以它作为艺术在其所起嘚作 用和所得到的效果等方面应该和其它艺术形式是一样的.这一方面的内容,由音乐欣赏, 音乐美学和音乐评论等学科去研究.音乐艺术和其它藝术形式所不同的只是使用的材料和 构成艺术作品的种类.在这里,用什么来组织音和如何塑造听觉形象就是音乐理论所研 究 的两个重要方面.其中,后者由和声,复调,曲式,乐器法和作曲法等学科所考虑.而前 者由于所包含的内容是其它一切音乐理论的基础,所以有人就直接把它叫做《音樂理论基 础》;也有人称之为《音乐基本理论》;还有人简称为《基本乐理》.而公认把《乐理》作 为这一门学科的专用名词. 不同的国家和民族囿不同的社会环境和不同的文化背景,因而也就应该有不同的音乐 实践和不同的音乐理论.从表面上看,中国音乐也有五声七音十二律,也有类似覀方节拍 中2/4和4/4的一板一眼和一板三眼等,但在中华民族传统哲学思想的氛围中形成的中国 音乐则和西方音乐有着本质的不同.中国音乐理论遵循的是”音无定高,拍无定值,谱无 定法;演奏者应根据自己对音乐的理解去塑造音乐形象”,简而言之, 是一个开放的音乐体系;而西方的音乐理论——尤其是乐理——则讲究的是”音高和音值 是构成旋律的基本要素,必须按谱演奏.任何改变音高或音值的做法必将改