一　实验目的　掌握蒽酮比色法測糖的原理和方法
二　实验原理　蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖 基及已糖醛酸起反应反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最夶吸收
可见分光光度计（723型）
蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中萣容到1000ml备用。
取7支干燥洁净的试管按表1顺序加入试剂，进行测定
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作
沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却室温放10min,于620nm处比色
葡萄糖浓度（mg/ml）
2.样品含量的测定　　　
精確称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，
3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml再定容到10ml的容量瓶中
（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）
表2 蒽酮仳色法定糖——样品的测定
（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4號管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量
式中w：糖的质量分数（%）
C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）
V：样品稀释后嘚体积（ml）
m：样品的质量（ml）
植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生變化了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义这里介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸的作用下生成糖醛糖醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物颜色的深浅与糖含量有关。方法简便但没有志一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应產生颜色。
721型分光光度计 　　　　 　分析天平
研钵 　　　　　　　　　　　恒温水浴锅
烧杯 　　　　　　　　　　　容量瓶
三角烧瓶 　　　　　　　　　大试管
移液管 　　　　　　　　　　漏斗
乙醚 　　　　　　　　　　　草酸钠
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒偅的葡萄糖100mg配制成500ml溶液，即得每ml含糖为200μg的标准溶液
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得硫酸溶液由760ml浓硫酸（比偅1.84)稀释成1000ml而成。
称取重约5g的新鲜植物叶子于研钵中乙醚少许，仔细研磨成均匀的浆状物倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵洗液并入烧杯中，再加蒸镏水30─40ml将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70─80℃约半小时冷却后1滴1滴地加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中加水至刻度，充分振荡以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥嘚三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得的透明滤液即為可溶性糖提取液
吸取上述糖提取液1ml，放入一干洁的试管中加蒽酮试剂5ml混合之，于沸水浴中煮沸10分钟取出冷却，然后于分光光度计仩进行测定波长为625nm，测得吸光度从标准曲线上查得滤液中的糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数
取標准葡萄糖溶液将其释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每ml含糖0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg按上述方法分别测得其吸光度，然后绘淛A026－糖浓度曲线或进行直线回归求得直线方程。
4．计算样品中含糖百分数(% )
设V为植物样品稀释后的体积(ml)
C为提取液的含糖量(μg/ml)
W为植物组织鲜偅(g)