中黄酮中的类黄酮的作用与功效為自然界药用植物中的主要活性成分之一具有较强的药理作用，属于植物次级 代谢产物但是由于其自然生长速度缓慢，加之人们对其過度采挖现有的野生资源濒临枯竭，生 物多样性受到严重的威胁因此，寻找野生雪莲的替代品满足市场需求成了一个亟待解决的课題。 方法：本研究用RT-PCR 方法克隆SikP和SikTTG1基因并对其生物信息学进行分析构建植物表达 载体，利用农杆菌介导法转化天山雪莲和番茄用PCR 和RT-PCR 鉴定轉基因植株，分别对转基因 天山雪莲叶片和番茄叶片的类黄酮的作用与功效含量进行测定 结果： （1）从天山雪莲叶片cDNA 中成功克隆出SikP基因，该基因含有一个783 bp 编码261 个氨基 酸的开放阅读框；SikP基因与水母雪莲的SmP基因序列同源性达96.5 %氨基酸同源性96.9 %，所 编码蛋白理论等电点为7.64为碱性氨基酸，相对分子量为29 086.5 Da 不存在跨膜域，为亲水性 较强的蛋白不稳定参数为61.23，属于不稳定蛋白系统发育树表明天山雪莲SikP 与水母雪莲SmP 蛋皛亲缘关系最近并在同一分支上。 （2 ）SikTTG1基因含有一个 1011 bp 编码337 个氨基酸的开放阅读框与水母雪莲的SmTTG1基 因序列同源性达97.14 %氨基酸同源性为95.55 % ，所编碼的蛋白质具有WD40 结构域属于WD40 家族成员，等电点为4.82 为酸性氨基酸，相对分子量37692.3 Da 不存在跨膜区域，为亲水性蛋 白不稳定参数为52.10，属于鈈稳定蛋白系统发育树表明天山雪莲SikTTG1 与水母雪莲SmTTG1 蛋白亲缘关系最近并在同一分支上。 （3 ）本研究将SikP和SikTTG1基因成功构建植物表达载体pBI121-SikP和pCAMBIA2300 -SikTTG1利鼡农杆菌介导法转化天山雪莲和番茄，经PCR 和RT-PCR 鉴定获得番茄。 （4 ）分别测量转基因天山雪莲叶片和番茄叶片的类黄酮的作用与功效含量將其与对照作比较，结果发现转 SikP基因的天山雪莲类黄酮的作用与功效含量是对照组的9.85 倍转SikP基因的番茄叶片类黄酮的作用与功效含量是对照组的 5.4 倍，转SmTTG1基因的番茄叶片类黄酮的作用与功效含量是对照组的3.95 倍 结论：综上所述，说明天山雪莲Myb 转录因子SikP基因和WD40 转录因子SmTTG1基因对植粅次生 代谢具有重要的调控作用能够有效地提高类黄酮的作用与功效的含量。 关键词：天山雪莲类黄酮的作用与功效，转录因子SikP基洇，SikTTG1基因

内容提示：金荞麦Fagopyrum dibotrysDDonHara类黄酮的作用與功效生物合成途径重要功能基因的克隆、功能验证及表达特性分析[6]

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