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研究背景：近年来各类药害事件頻发其中有关由于药品生产过程清洁不彻底， 导致不同品种药品之间交叉污染或混料的的事件时有发生因而各国药监部门越来越 重视藥品生产过程清洁验证。国内外法规均对产品生产过程及生产结束后的设备的清 洁提出清洁验证要求；如：中国 2011 版 GMP（药品生产质量管理规范） ：第一百四 十三条规定清洁方法应当经过验证 并对验证内容作了详细规定。 欧盟法规 12.70 至 12.74 条规定清洁程序应当经过验证要求采用风險管理的方法进行清洁验证。清洁 验证方案中取样方法应当能够定量测量清洁后在设备表面残留水平；清洁验证所使用 的分析方法应当经過验证；美国 FDA（美国食品与药品管理局）在 GMP（药品生产 质量管理规范）211.67 章节中也规定了设备清洁验证的相关内容要求企业必须建立 书面嘚清洗方法验证通则； 研究目的：本文旨在通过科学的运用药学相关知识及采用风险管理的手段寻求相 关清洁验证的思路，为能够防止药品生产过程中的交叉污染提供科学依据 研究方法：本文主要通过对头孢类多品种粉针生产线与产品接触部件清洁过程 中最差条件产品的選择以及对清洁过后取样方法（回收率）的选择及样品分析方法 进行验证，同时从如何确定最大允许残留限度等方面加以论述按照文中淛定的验 证策略进行相关操作后按确定的取样方法进行取样并检验。依据检验结果来证实清 洁方法的有效性 研究结论：本文最终证实了按照标准清洁程序对直接接触产品设备部件的清洁能 够有效地将产品残留去除到不会危害到病人安全的水平。

关键词：风险管理；污染；殘留限度；清洁验证

1.1.1 由于清洁不彻底导致药品交叉污染的药害事件

1992 年FDA（美国食品药品管理局）对一家进口原料厂发出警告，该厂使用同┅ 台设备生产甾体及非甾体类物质FDA（美国食品药品管理局）认为清洁验证不当， 只对前一种产品残留做了验证但用 TLC（薄层色谱）法对後一产品淋洗水检测发 现了副产物及降解物的证据。1998 年消美国专利药消胆胺树脂制剂的召回使 FDA 进一步认识到因不当规程而导致交叉污染嘚可能性。用于生产药品的原料药被生产 农用杀虫剂中产生的中间体和降解物污染本案例中的交叉污染被认为是由于回收 溶剂的重新使鼡。回收溶剂由于缺乏对溶剂桶的重新使用进行控制而被污染用于 储存杀虫剂生产过程中的回收溶剂的溶剂桶，后来又用于储存树脂生產过程的回收 溶剂公司未对这些溶剂桶进行适当的控制，也未对桶中的溶剂进行适当的测试 以及未对桶的清洗过程进行验证。部分被殺虫剂污染的原料药被运输到在其他地方 的另外一家工厂进行最后加工由于该工厂的流体床干燥器袋子被原料药中的杀虫 剂污染，结果導致在该工厂地点生产的很多批次产品相应的被交叉污染该地点在 正常情况下是不生产杀虫剂的。经验证明当一条生产线生产多品种時，在生产结 束后对设备部件的清洁非常重要如果清洁不彻底将导致上批产品残留，引起药品 交叉污染危害病人健康。在历史上FDA（媄国食品药品管理局）检查官寻找由 于对设备不当的清洗和维护和/或不良的灰尘控制系统而带来的总体不卫生情况。而 且从历史上来说，FDA（美国食品药品管理局）更加关注非青霉素药品被青霉素 污染、或药品中的活性激素或荷尔蒙交叉污染由于实际或潜在的青霉素的交叉污 染所致，在过去的十年中有很多药品被召回同 时 PIC/SRecommendationsonvalidation masterplan, installation （原料药） ，或清洁剂、微生物或其他物质（例如尘埃粒子灰尘，润滑剂原料，

中间体辅料等）污染。很多情况下设备不是专用而是生产多个产品。为了避免 污染下一产品必须有充分的清洁规程同时要有充分嘚证据证明所采用的清洁方法 能够对设备进行彻底清洁。即要通过验证的手段来进行证明 1.1.2 各国法规对清洁验证要求 中国 2010 版 GMP（药品生产质量管理规范）第一百四十三条规定药品生产企 业所使用的清洁方法应当经过必要的验证，证实药品生产过程中使用清洁方法清洁 效果证實其能够有效防止污染及交叉污染。在进行清洁验证前应该系统的考虑设 备的具体使用情况及设备本身的状况包括设备的材质以及难清洗的位置，同时应 考虑产品性质同时清洁时若使用的清洁剂以及消毒剂、还应考虑清洁剂及消毒剂 的残留。同时应考虑采用的取样方法囷取样位置以及这种取样方法的取样回收率 （R ） 、考虑产品是否有残留以及残留物的相关理化性质和残留限度对于残留物检 验方法的灵敏度等因素[2]应充分进行考虑； 欧盟 GMP （药品生产质量管理规范）12.70 规定药品生产企业使用的清洁程序应当经过验证才可使用。一般来说 ,清洁验證应当 针对那些一旦被污染或由于偶然带入的异物会对原料药产品的质量产生最大威胁情 况或工艺步骤 例如,在早期的生产中,设备清洁程序可能不需验证,在此遗留物可以在 后续的精制过程中除去。 12.71 规定清洁程序的验证应当反映出设备实际使用的模 式如果有不同的原料药或Φ间体使用同一台制造设备 ,并且使用相同的清洁方式对 设备进行清洁,应当选用一种具有代表性的中间体或原料药来进行清洁验证。这种选 擇应当跟据溶解性以及不同的清洁难度,药效,毒性和稳定性计算出残留限度来进行 12.72 清洁验证方案中应当对所要清洁的设备 ,程序, 物料 ,可接受嘚清洁水平, 监测和 控制的参数,以及分析方法进行描述。该方案同样应当阐明得到样品的类型,以及如何 进行取样和标识12.73 规定取样应当包括擦拭法,冲洗法或其他可用的方法(即,直接 萃取),如果可能,同时检测可溶解或不可溶解的残留。 所使用的取样方法应当能够定量 测量清洁后在设備表面残留水平12.74 规定所使用的分析方法应当经过验证 ,具有 检测残留物或污染物的灵敏性。每一种分析方法的检测限度应当具有足够的灵敏度 来检测已经制订的残留或污染接受水平应当制订该方法的回收率水平。残留限度 应当具有实用性,可操作性,可证实性,以及最有害的残留 限度可以制订在已知的原料 药或其最有害成份的药理学,毒理学,或生理学活性基础上。12.76 规定进行验证后,

应当在适当的间隔对清洁程序进荇监测,以便保证这些程序在日常生产中有效如果 可行,应当用分析检验和目测检查来监测设备的清洁程度 [3]；FDA（美国食品药品管 理局）的 GMP（藥品生产质量管理规范）211.67 章节中规定了设备清洁验证的要求： 企业应建立书面标准操作程序（SOP） ，其中必须详细规定设难关备各部件的清洗过 程；必须建立书面的清洗方法验证通则；清洗方法验证通则应规定执行验证的负责 人、批准验证工作的负责人、验证标准（合格标准） 、再验证的时间；对各生产系统 或设备部件进行清洗验证之前应制定专一特定的书面验证计划，其中应规定取样 规程、分析方法（包括分析方法的灵敏度）[4]当然，清洁设备的主要理由是防止药 品被污染或掺假综上所述清洁验证已经成为企业必须遵守的法规。药品企業只有 通过科学严谨的态度采用正确适当的清洁验证方法才能证明所进行的清洁工作满 足药品生产需求，降低药品交叉污染的风险使嘚产品受污染报废的可能性最小， 从而对患者的负面效应可能性最小降低产品投诉的发生率；通过对产品接触部件 的正确清洗可以达到延长设备的使用寿命的目的。

1.1.3 清洁验证成功的关键前提 清洁验证成功的前提是要有好的完善的清洁方法及程序没有合理的的清洁程 序，即使清洁验证策略非常科学也不能得到好的结果，不能达到法规要求不能满 足病人的需求。清洁验证应该集中在验证过程的目标上各企业在清洗过程中使用了 大量的样本和验证程序，但缺少真正地对设备的清洗步骤进行有效性评估当对清洗 设备进行评估时，应当注意详细说明一些问题例如，认为设备或系统的清洁的标准 应该是什么必须要用手擦洗吗？手擦清洗跟洗涤剂清洗相比应该伴随着什么樣过 程会有多大的差别？从批次到批次的手工清洗过程与从产品到产品有什么样的变 化这些变化是否必要和有效？由于我们必须确定整个过程的有效性所以在检查和 评估清洗过程时，回答这些问题的重要性是显而易见的同时对上述问题的回答也可 能断定哪些步骤可鉯省略，来进行更有效的评估并且为公司节省一定的资源。在确 定清洁程序前应当确定对每个设备部件的清洗程序的数量进行评估有過有必要建议 尽量使用同一规程，避免清洁程序过多导致清洁过于复杂按理来说每个设备或系统 的部件都应该有相应的一种清洗过程。泹是这要取决于被生产的产品是何种产品， 以及清洗是否发生在同一产品的批次之间（如在较大的清洗规

模中） 还是发生在不同产品嘚批次之间。当在同一产品的批次之间进行清洗时（或 者在原料药工艺中同一中间体的不同批次之间） 公司只需要达到“设备看起来是清 洁”的标准就行了。通常批次之间的清洗过程并不需要验证在设计清洁程序时应考 虑设备的设计，检查设备的设计尤其是在那些大嘚系统中，可能使用了半自动或全 自动的实地清洗系统这是系统的设计如果不进行检查确认会非常令人担心的。例 如应当使用没有球閥的清洁管道。当使用不清洁球阀时（在原料药企业中很常 见） 清洗过程会更困难些。当这些系统都相同时执行清洗操作的人员应该知道问 题所在，并且在清洗这些系统和阀门方面要经过特殊的训练企业应该确定清洗工作 人员是否了解这些系统以及在清洗系统中的训練程度和经验。另外还要核对书面的经 核实的清洗过程来确定这些系统是否被正确的鉴定和验证在一些更大的系统中，例 如那些使用很長的传送带或管道系统应该对流程图和鉴定阀门的管道系统图和书面 的清洗程序进行检查。应当在管道和阀门上贴上标签并且可以被執行清洗过程的工 作人员很容易地辨认出。有时对阀门的示意图和标签鉴定不当，会导致不正确的清 洗操作应该经常检查清洗过程的攵档中是否保存了通常关键的因素；并鉴定和控制 在过程结束和每个清洗步骤之间的时间长度。这对于局部的、悬浮剂和原料药操作尤 其偅要在这些操作中，残留物的烘干将直接影响到清洗过程的效率 是否使用 CIP （在线清洗） 系统清洗工艺设备， 应该考虑微生物部分的设備清洗这主要是指预防 措施，而不是在玷污后再除掉污染物应该证明，常规清洗设备和设备存储时就不会 有微生物繁殖例如，设备茬存储前应该被干燥任何情况下都不允许有污水留在清 洗后的设备中。在清洗完成之后用于无菌处理和产品可以支持微生物生长而不經消 毒处理的设备也许要进行杀菌和卫生处理。这种杀菌和卫生处理程序已超出指导范 围强调在充分的设备清洗和存储中控制生物负荷，从而保证接下来的杀菌或卫生处 理程序达到确保无菌是很重要的因为设备杀菌过程不能够获得显著的失活或除去热 原质，所以这对无菌处理热原质控制的立场来看也特别重要还要考虑清洗过程记录 检查通过验证的清洗过程的程序的细节和特性，还有要求文件的数量峩们已经明白 常规的标准操作规范（SOP） ，而其他人使用批记录或要求明确记录每个执行步骤的 日志系统执行不同的清洗步骤或程序的必偠文件数量因为系统和清洗过程的复杂 性、操作员的能力及对操作员的培训培训情况而变化。 如果需要更复杂的清洗程序记录关键清洗步骤（如某种原料药的合成工艺）是

很重要的。这种情况下设备本身的详细记录文档应包括谁清洗的和这些清洗可维 持的时间的信息。嘫而对于相关简易的清洗操作，执行基本文件的全部清洗过程 就足够了其它因素，如清洗历史、清洗后发现的残留物级别、和测试结果的可变 性也可支配需要文件的数量。例如如果在清洗后发现了不定的残留物级别，特 别是认为可接受的清洗过程那么就必须确定過程和操作员的执行是否有效。应该 做适当的评估如果认为操作员的执行有问题，就需要更多的文件（指南）和培训 分析方法应该确萣用来检测残留物或污染物的分析方法的特征和灵敏度。用分析技 术能检测生产和清洗过程中很低级别的残留物如果没有发现污染物或殘留物级别， 并不意味着清洗后不存在残留物污染物只能说明样品中不存在高于分析方法灵敏 度或检测限度的污染物级别。公司应该通過结合从设备表面重新找回残留物及残留 物回收率（如 50％或者 90％）的分析方法对使用的分析方法进行挑战。这在根据 取样结果下结论前昰很必要的不好的取样技术会有相反的测试结果。人们对清洁 验证的意义都很了解了但往往忽略了清洁验证中相关分析方法的验证。被清洁验 证所采用的分析方法应在清洁验证开始前就应该进行分析方法的验证目前仍有很 多企业在清洁验证前忽略分析方法的验证；显洏易见，分析方法的验证相当之重要； 采用经过验证的分析方法对目标化合物检验是保证检验结果真实可靠的前提条件。 如果采用的分析方法不适用于分析清洁验证样品那么分析所得的结果就失去了它 的可信度；从而使清洁验证工作失去了意义，同时更严重的是以该结果来判断合格 与否就可能得出错误的结论；在制药行业已经有相关案例发生；如某企业生产高活 性化学药物 A,同一套设备也用于生产其他藥物，此企业通过相关计算得出 A 的残 留限度应为 10ppm ；而该企业对分析方法也进行了验证但其验证的线性范围是 100ppm 到 1000ppm；10ppm 已经低于该定量限，所鉯该方法不能准确确定残留量 因而也不能说明清洁后的效果是否最终满足限度要求；因而也不能证实按照标准清 洁程序对直接接触产品設备部件的清洁能够有效地将产品残留去除到不会危害到病 人安全的水平。用于清洁验证中分析样品残留的分析方法的验证其原理与一般汾析 方法验证相同；但由于清洁验证样品的特殊性应具体情况具体分析，清洁验证的 分析对象时残留物因而清洁验证的分析方法验证應与杂质定量分析方法相仿，要 求对准确度精密度（重复性、中间精密度） 、专属性，定量限、线性、范围进行验 证另外在某种情况丅也要求对检测限进行验证。专属性是指在其他成份（如杂质

降解物，辅料）存在下采用的分析方法能够准确的测定被检测物的特性嘚能力， 对于清洁验证来说应该通过实验来说明在一个典型组成的残留物中，对被检测物 的检出不受其他组分影响线性系指在设计的范围内，检测结果与试样中被测物的 浓度直接呈线性比例关系的能力范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性， 测试方法适用的試样中被测物的高、低限浓度或量清洁验证的分析范围一般来说 应该从定量到残留物限度的 200%。范围宽是很必要的如果范围的下限即为殘留物 的限度，那么过程监控就失去了早期报警的能力线性的合格标准应该在方法验证 以前予以确定。不同的分析方法要求不同。通瑺杂质线性的可接受值为 R2 大于 0.98这也可适用于清洁验证。线性实验应该至少有 5 个浓度水平每个浓度水平至 少平行做两次，一般三次更哆当然更好。截距是反映偏差的很好的指标如果截 距为 0，则没有偏差如果截距为 0 或者很小，那么化验时就可以成功地运用单点校 正 洅仔细地检查这条校正曲线， 可以发现最高浓度 40ppm 可能就偏离线性了这个 浓度应予以去除，因为如果包括了该点 R2 为 0.997去除该点后，R2 为 1.000满足 了事先设定的要求，并且截距显著降低至此完成了线性确定的实验。上述情况 可以得出在 0.70ppm 到 30ppm 的范围内，方法为线性的结论第二种方法确定线性 和范围的原理是：被测物在线性范围内的响应应该相对稳定。可将各响应值与其浓 度的比值对浓度作图理想的曲线是一条岼行于 X 轴的直线。有两条线分别代表 95% 和 105%的响应/ 浓度比 超出 105%的或者低于 95%的点就被认为是不在线性范围内 了[26]。准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度 有时也称为真实度，用回收率来表示；前面有提到对于清洁验证来说回收率可在 100%，最低在 50%均可精密度系指在规定的测试条件下，同一均质样品经多次取 样检测所得结果之间的接近程度精密度分为重复性、中间精密度和重现性。精密 度一般以相对标准偏差的百分数来表示对杂质定量的系统精密度一般要求不大于 5%，这同样也适用于清洁验证范围也可视情况洏放宽。重复性是指在相同的操作 条件下间隔较短的时间、由同一个分析人员测定所得结果的精密度。可结合上述 的准确度实验 在每┅个浓度水平做三份数据， 每个水平单独计算 RSD （相对标准偏 差） 中间精密度系指在同一实验室改变其内部条件所测得的测定结果的精密喥。如 果在清洁验证期间样品的测试条件无法固定则需要做中间精密度。可以采用第二 个分析员重作准确度或重复性研究每个浓度水岼平行三份数据，或者在

目标值重复六份数据如果有不同的仪器可选，分析员可另用一台仪器如果用的 是色谱方法，也可以换一根柱孓最好是不同的批号甚至是不同供应商的。对于擦 拭实验可能需要考察不同来源或不同批号的棉签。一般情况下清洁验证持续的 时間不长，能够保证测试条件的固定此时也可不必做中间精密度。重现性是指不 同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度这在方法轉移或者分析方法将被法 定标准采用时要做。对于检测限（LOD）和定量限(LOQ)在常规的原料药或者制剂 的分析中，检测限和定量限值一般并不偅要因为被测物的量一般要远大于定量限。 但在清洁验证中就不同了因为其分析目的就是要确定痕量的残留物，所以这两个 值是清洁驗证非常关心的传统的方法是采用信噪比法。大多数的现代色谱和光谱 分析软件都有测量基线噪音的方法检测限一般是噪音的三倍量，定量限一般是十 倍量定量限是符合一定的精密度和线性要求的最低浓度。只有按上述要求对清洁 验证采用的分析方法进行验证后才能證实检测结果的可靠性才能保证对清洁效果 有科学的评价。 1.1.4 本文论述的清洁验证的生产设备及生产状况 设备的清洁是指在某种条件下鼡一种或一套清洗方法清除残留在设备上可见 及不可见组分的过程，并达到可接受的残留限度水平目前行业内所使用的清洁方 法包括手笁清洗、自动清洗及半自动清洗。手工清洗为国内大多数企业使用的方法 但手工清洗对设备要求极高，要求设备尽可能可拆若不可拆應证明难清洗部位的 清洁效果。本公司使用德国 BOSCH 生产的气流分装机产品为头孢类无菌粉针剂， 清洁规程规定每天生产结束后及每次更换品种前应对药粉直接接触设备部件进行清 洁 所有与产品直接接触部件均能拆卸成小块， 并无死角 设备材质为 316L 不锈钢。 设备部件清洗后鈳直接灭菌该条生产线是多品种生产线，主要为头孢类粉针产品； 共计 11 个品种产品类表见表 1 产品列表及相关数据。在设备清洁规程中規定使

用的清洁介质为注射用水设备清洁过程中未使用清洁剂，该生产线生产的所有产 品均为水溶性的头孢产品具体生产流程为：BoschAFG320V 分裝机安装在 B 级无 菌分装间，它用于将无菌粉末分装至西林瓶中灭菌后的西林瓶从灭菌隧道出来后， 进入到分装机的空瓶转盘上然后进叺并排的进瓶通道，再通过进瓶传送带送到分 装台的星轮加粉药粉在 A 级层流的保护下人工通过加粉装置加到大粉箱中，药粉

有搅拌器不停搅拌然后通过大粉箱分配到小粉箱中。当分装轮分装孔转动到与小粉 箱相接触的位置时分装孔利用真空把药粉吸入到分装孔的腔室Φ。药粉的吸入量通 过调节分装孔的腔室来控制吸好药粉后，分装孔转动到瓶子的上方利用压缩空气 将分装孔里的药粉装入瓶子里。汾装机每次可平行分装 2 个西林瓶然后由传送带送 到加胶塞的星轮。无菌或灭菌后的胶塞由人工加入胶塞进料斗然后通过胶塞振荡器 EMSE 和丅塞轨道到达压塞头。推杆利用真空吸附胶塞再送到压塞摆头上然后解除 真空将胶塞释放。当压塞摆头转到西林瓶上方时压塞杆上下運动对胶塞施加压力把 胶塞压入瓶子中。胶塞平台每次可加 2 个胶塞整个分装和加塞过程在 A 级层流的 保护下进行。压胶塞结束后西林瓶甴出瓶星轮传到传送带，人工选出不合格的半成 品最后，压塞后的半成品再经传送带传至压盖机分装机每分钟可处理 320 个西林 瓶。分装機由人工进行控制和清洁去除分装机产品残留的清洁操作由人工按照批准 的《粉针车间无菌设备部件及工具的清洗操作规程》完成。其清洁过程简述如下：生 产结束后在分装间首先逐一拆下每一部件（分装轮，大粉箱小粉箱；吸粉管）； 并记录生产结束时间，同时将仩述部件放入不锈钢桶中通过传递窗传到洗消间，在 四小时内将上述设备部件浸泡于 60℃的热注射用水中 10 分钟后然后取出每一部件 在注射用水水龙头下使用 40℃的注射用水冲洗 3 分钟，每一部件重复冲洗三遍在 A 级层流下沥干。

本文主要以探讨头孢类无菌粉针剂与药品直接接觸部件的清洗过程为验证对象 通过科学的方法采集适当的数据，证明按照清洁规程清洁设备能够始终如一的满 足清洁要求。在进行清潔验证前首先要清楚验证的目标是针对那些使用某种特定设 备生产一种或多种产品后所使用的清洁规程是否适用于通过该清洁程序把该产品从 设备中清洗干净的清洗方法或程序进行的验证关注的是经过清洗后所生产的产品 的残留物是不是会带到了下一个批次的不同产品当Φ，从而影响到另一个产品的疗 效和安全性如果企业使用的是同一套清洁方法，那么可以选择有代表性的产品进 行清洁验证选择的依據可以根据产品的性质，如产品的溶解性活性，安全性； 及是否使用清洁剂等综合合考虑FDA 要（美国食品药品管理局）求各药品生产企 業应具有详细地记录设备各种零件的清洗过程的书面程序（ SOP's） 。如果公司在清

洁不同批次的相同产品时使用一种清洗过程而在清洗不同產品时使用另一种不同 的清洗过程，那么要求各公司的书面清洗程序应能包括这些不同的细节相似地， 如果公司在除掉可溶于水的残留粅时使用某一种清洗过程而对于不可溶于水的残 留物时使用另外一种清洗过程，那么清洁的书面程序应当说明这两种过程并且明 确的闡述出何时应该遵守已知的过程。当生产过程会产生难以除去的焦油状或粘状 残留物时原料药公司也许会决定使用特定的设备来进行特萣的化学生产步骤。对 于这种情况也应指定特定的清洗流程如：流体床的干燥器袋是很难清洗的设备之 一，经常用于特定的产品清洗過程本身留下的任何残留物也必须清除掉（清洁剂、 溶剂等） 。因而最初的清洗工艺的研究是我们清洁验证成功的关键通过本文对头孢 粉针剂清洁验证方法的探讨，使我们能够运用科学的药学专业知识及采用风险管理 手段通过最差条件待清洗产品的选择，制定科学合理嘚残留限度水平以及以怎 样的取样方式可以获得反映设备清洁后真实残留量的样品并可以定量的检出残留； 应该确定用来检测残留物或汙染物的分析方法的特征和灵敏度。用数据证明分析技 术能检测生产和清洗过程中很低级别的残留物；同时通过科学的计算以及分析方法 嘚验证证实我们所使用的清洁方法是有效的，结论是科学合理最终证实了按照 标准清洁程序对直接接触产品设备部件的清洁能够有效哋将产品残留去除到不会危 害到病人安全的水平。

通过本文所述清洁验证方法证实已经批准的清洗程序能使设备适用于药品生 产通过对朂差条件待清洗产品的选择，制定科学合理的残留限度水平以及对样 品的取样方式进行回收率考察，证实该取样方法可以获得反映设备清洁后真实残留 水平的样品并且证明该残留样品能够被定量的检出；用充足的数据证明分析技术 能检测生产和清洗过程中很低级别的残留物；同时通过科学的计算以及分析方法的 验证，证实我们所使用的清洁方法是有效的结论是科学合理。最终证实了按照标 准清洁程序對直接接触产品设备部件的清洁能够有效地将产品残留去除到不会危害 到病人安全的水平证明按照规定的清洁程序对直接接触产品设备蔀件清洁能够有 效地将产品残留去除到不会危害到病人安全的水平。

第 3 章验证方案的制定

3.1 最差条件产品的选择
清洁程序中最关键的要素是清洁的对象以及要去除的物质。选择清洁程序前了解 残留物的性质至关重要残留物一般均是潜在的物质，它通常是最终产品活性成汾， 或在生产中产生的其他物质（中间产物副产物，或某些产品的降解产物等） 明确某些 物质的化学性质既可以使我们选择合适的清洗方法将物质最大限度的去除。对于清洁标 记物的选择一般选择溶解度小、毒性或活性高的成分作为清洁标记物[5]本公司生产的产 品为头孢类无菌粉针剂，品种及规格见表 1；清洁 SOP（标准操作规程）规定每一批产品 生产结束后均应对直接接触产品设备部件进行清洁；该生产线為多品种产品生产线按 中国 GMP（药品生产质量管理规范）法规要求应清洁进行清洁验证。为了科学合理的设 定清洁验证方案应选择最差條件产品。由于生产线所生产的品种均为水溶性产品因 而用于验证的产品应选择溶解度最小的产品，溶解度最小的产品为最难清洗的产品即 待清洗产品选择溶解度最小的产品。如果溶解度最小的产品按照清洁规程进行清洁后产 品残留小于规定限度那么其他产品均能满足要求。下表为产品列表（表 1 产品列表及 相关数据）

表 1 产品列表及相关数据

注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠 注射用头孢哌酮钠[7] 注射用头孢他啶[8] 紸射用头孢呋辛钠[9] 注射用头孢噻肟钠[10] 注射用头孢曲松钠[11]

注射用头孢唑林钠[12] 注射用头孢尼西钠[13] 注射用头孢米诺钠[14] 注射用硫酸头孢匹罗[15] 注射用頭孢西丁钠[16]

根据表 1 中所列的产品水溶解度项下选择溶解性最差的注射用头孢他啶作为 最差条件的待清洁产品.

3.2 产品残留限度的科学选择

没囿一个法规规定决定清洗过程是否有效的认可参数或方法。因为原料药和成品剂 型生产工业中使用设备和产品中存在着巨大的差异所以導致确定残留限度的复杂性。 各公司确定残留物限度的根据通常应当合理的基于生产商对其生产的产品的了解而且 应当是可以做到的并鈳以证实的。为了确立合理的限度各企业明确分析方法的敏感性 是很重要的。通过查阅文献资料不难发现行业代表在著作或陈述中提箌了一些限度标 准，包括分析检测级别如 10ppM生物活性级别如 1/1000 的正常治疗剂量，器官感觉级 别如无可见残留物在确定残留物限度时，也许呮是集中注意主要的反应物的做法通常 不被认可因为也许有别的化学变异产物（降解产物）更难以除去。有的情况下除了 进行化学分析，薄层色谱分析（TLC）也是必要的在原料药生产工艺中，特别是某些 如类固醇的高效化学制品生产中如果设备不是专用的，必须考虑副产品的问题检查 的目的就是要保证任何限度的根据都有科学道理。目前对于非高活性非高毒性、非高 致敏性药品药品清洁，国际上認可的接受限度为目测洁净干燥，无臭无味对于制剂 还应小于生物活性限度-最小日治疗剂量的（MTDD）千分之一，一般要小于 10ppm对 于原料藥总残留应在更换的产品中小于千分之一。对于微生物可根据洁净级别划分：十 万级（C 级）环境下的杂菌总数应小于 25CFU/CM2(棉签擦拭法)；十万级（C 级）环境下 的杂菌总数应小于 25CFU/ML(淋洗水法)万级区杂菌总数应小于 1CFU/CM2(棉签擦拭 法)；万级区的杂菌总数小于 10CFU/100ML(淋洗水法)；内毒素应小于 0.25CFU/ML(淋洗 水法)；无菌万级区（B 级）杂菌总数应小于 1CFU/25CM2(棉签擦拭法)；内毒素小于

0.25CFU/ML(冲洗法)[17]；由于本公司产品为头孢类的产品，在清洗过程中无降解产 物且易溶于水，在计算残留限度时只需考虑各品种中限度要求最严格的标准即可 在计算残留限度时应综合考虑各种残留限度的计算方法，使用各种方法计算出残留限 度从中选择出数值最小的作为本公司产品的允许残留限度。具体计算见 3.2.1 3.2.1 计算公式 3.2.1.1 日治疗剂量法[18]

无可见作用剂量水岼克 NOELpp, g

说明： pp:待清洗的最坏条件产品 np:后续产品 1000: 安全系数 MTDD：最低

日治疗剂量，毫克 NOEL:无可 见作用剂量水平 LDSD:最大日 剂量毫克 W:最小批量，公斤 R: 棉 签 中 活 性 成 分 的 回 收 率 ， %Se: 接 触 产 品 的 设 备 表 面 积 cm2LD50: 半数致死量，克 / 公斤 70:成年人平均体重公斤 2000: 经验系数

最大允许残留确定 3.2.2.1 日治疗剂量法選择最坏条件来计算最大允许残留，以替代计算不同产

品更换方式时许可的最 大残留最坏条件的选择为：选择 MTDD（最低日治疗剂量）的最尛值，以及批量 与 LDSD（最大日剂量）比值的最小值产品清单以及相关的批量、日剂量参见表 1。

3.2.2.2 毒性数据法选择最坏条件来计算最大允许残留以替代计算不同产品更 换方式时许可的最 大残留。 最坏条件的选择为： 选择 LD50 （半数致死量） 的最小值 以及批量与 LDSD （最大日剂量）比徝的最小值。产品清单以及相关的批量、日剂量参见表 1

3.2.2.3 总限度法（10ppm） 选择最坏条件来计算最大允许残留，即选择最小的批量值产品清單以及相关的 批量参见表 1。

综合以上计算结果由于总限度法计算得出的数值（0.16?g/cm2）最小，因此将 其作为此方案的最大允许残留即用规定方法清洁后的设备允许的最大残留限度为 0.16?g/cm2

3.3 清洁验证分析方法的验证

设备表面的残留物是清洁验证的目标分析物。残留物可能是活性药物、輔料或 者清洁剂在撰写清洁验证的方案的时候,首先要确定被测物。如果主药是高活性的, 那么残留物中的主药应予以定量;如果对清洁剂的殘留有要求,则清洁剂也应考虑;如果 不需要明确某组份,则可以以残留物的整体作为被测物其次,当制定合格标准即规定 被测物允许的残留限喥后。应选择适宜的分析方法,该方法可以是专属性的方法,也可 以是非专属性的方法被清洁验证所采用的分析方法,应该在清洁验证开始之湔,就完 成它自身的方法验证。采用经过验证的分析方法,是保证分析结果真实可靠的前提条 件若所采用的分析方法并不适用于分析清洁验證样品,那么所得的分析结果就丧失 了可信度,不仅使整个清洁验证工作失去了意义,更严重的是以该结果来判断合格与否 就可能得出错误的结論。通常清洁验证分析方法验证包括专属性准确度（回收 率）和范围、精确度、线性、选择性、检测限度、定量限、标准溶液和样品溶液的 稳定性。回收率的分析方法验证在 3.3.4 取样方法的验证中详细描述.精密度系指在规 定的条件下从同一个均匀样品中，经多次取样测定所嘚结果之间的接近程度通 常用相对标准偏差（RSD）来表示。定量检查的相对标准偏差（RSD）应不大于 10%淋洗法和棉签法用于限度检查通常不需要做精密度实验。由于本文使用棉签擦 拭法故用于限度检查时不需做线性/范围验证检测限系指在确定的试验条件下，试 样中被测物能被检测出的最小量；定量限系指在确定的试验条件下试样中被测物 能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度淋洗法和棉签法 用于限度检查只需做检测限实验。通常检测限是指信噪比为 3：1 时被分析物的浓 度定量限是指信噪比为 10：1 时被分析物的浓度。本文依据 3.2 确定的允许的残留 限度 通过对头孢他啶产品残留检测的高效液相色谱法进行分析方法验证 （检测限、 定量限） ，通过对清洁驗证分析方法的验证来证实在清洁验证方案中生产完注射用头 孢他啶对设备进行清洁后取样样品能够被定量的检出本实验采用高效液相銫谱法 检测产品残留，因而要对高校液相色谱法进行检测线及定量限的验证同时

要分析样品的稳定时间，以确定样品在检测前是完好的 3.3.1 实验仪器 1200Series 型高效液相色谱仪（Agilenttechnologies） XSZ205DU 十万分之一电子天平（梅特勒） 3.3.2 头孢他啶溶液的稳定性 3.3.2.1 色谱条件：采用头孢他啶在 EP6.5[18]（英国药典 6.5）上含量測定法的色谱条 件。 色谱柱： -尺寸：长度=0.15m内径=4.6mm -固定相：己基硅烷键合硅胶（5?m） 流动相：4.3g 磷酸氢二钠和 2.7g 磷酸二氢钾溶解于 980ml 水中溶解后，加 20ml 乙腈混合均匀。流速： 2ml/min检测器：检测波长 245nm 进样体积：20?l 运行时 间：6min。 3.3.2.2 方法：取 0.63?g/ml 的头孢他啶溶液置于 25℃环境中，在 4 小时内每 10 分钟进样一佽共计进 24 次样。并记录头孢他啶主峰面积在表 2 上同时计算 RSD.要求 24 个样品的相对标准偏差（RSD）值小于 2.0%[19]；并将 24 个峰面积按照 时间点和峰面积莋成散点图。见下图 1；24 个峰面积的液相色谱图见附录 2 中图 2 至 图 25；如果在 4 小时内头孢他啶各样品主峰面积计算相对标准偏差（RSD）值小于 2.0%证奣样品可在常温下存放四小时，即清洁验证样品应在取样后四小时内完成 检验 表 2 头孢他啶主峰面积

图 1 峰面积对应的散点图 经以上实验数據在 230min 内，头孢他啶溶液的稳定性良好因而清洁验证样品 应取样后 230 分钟内完成检验。

3.3.3 头孢他啶溶液定量限、检测限为确保清洁验证中收集嘚头孢他啶溶液可以被检测 出来需要测出头孢他啶溶 液的检测限。采用头孢他啶在 EP6.5（英国药典 6.5）上含量测定法的色谱条件色谱 柱： -尺団：长度=0.15m，内径=4.6mm -固定相：己基硅烷键合硅胶（5?m）

流动相：4.3g 磷酸氢二钠和 2.7g 磷酸二氢钾溶解于 980ml 水中溶解后加 20ml 乙腈，混合均匀流速： 2ml/min。检测器：检测波长 245nm 进样体积：20?l 运行时 间：6min 3.3.3.1 用头孢他啶标准品（CRS）配制 0.1mg/ml 头孢他啶溶液，采集计算峰高 与主峰附近两分钟的噪音比值。计算出洳果比值为 10 时的溶液的浓度配制，采集 再次计算溶液的浓度， 直到峰高与主峰附近两分钟的噪音比值为 10～15 之间[20]记录 此时溶液的浓度，作为定量限用溶液 3.3.3.2 同法制得上述比值为 3～8 时头孢他啶溶液记录溶液浓度，作为检测限用 溶液[21] 3.3.3.3 定量限用溶液和检测限用溶液均需要连續测试 3 次，最终取浓度平均值作 为定量限和检测限 3.3.3.4 分别记录定量限和检测限溶液浓度，以及稀释过程在表格 3表格 4。 3.3.3.5 计算：检测限应该尛于下列数值的一半

RSD（%） 溶液浓度 规定

表格 4 检测限实验过程及结果 过程

3、并将结果记录下表，计算 RSD

根据上表实验结果可看出头孢他啶的檢测限浓度为 4.604× 10-5mg/ml定量限浓 度为 1.151× 10-4mg/ml；均小于 4.0× 10-4mg/ml 的一半.证明使用本分析方法能够检出 并准确定量清洁后产品的残留。本分析方法适用于清洁驗证分析方法学要求

3.3.4 设备表面残留产品取样方法的验证取样方法通常包括棉签擦拭法及冲淋取样法两 种方法[21]，擦拭取样法的优点直 接对表面污染进行评估能将不溶物或难溶物从设备表面实际去除；可以评估难以 清洗和相当容易接近的区域，使得可确定每个给出的表面区域的污染物或残留物的 级别另外，不能溶解的残留物可以通过物理切除的方法来取样缺点是不易在大 型设备上实施，从小面积获得的結果外推至设备的整个产品接触表面不准确；而且 不易对难接近的区域进行取样而淋洗法优点：易于取样，并可对整个产品接触表 面进荇评价同时可对难以接近、不易拆卸或日常生产中不拆卸的设备进行评价。 缺点是不会实际去除污染物冲淋溶剂或许达不到一些难以觸及的部件，并且对一 些不溶于水的物质需使用有机溶剂进行溶解增加清洗难度。残留物或污染物可能 不溶解或堵塞在设备中用到的┅种类似物是“赃罐”。在评价对不干净的药罐的清 洗时特别是那种有干结残留物的，不应该只看冲洗水是否干净而应该看药罐是 否幹净。表面直接取样首先要确定使用的取样材料类型和对测试数据产生的影响 因为取样材料可以妨碍测试。例如发现药签上粘合剂的幹扰样品的分析。因此

在早期的确认程序中，保证取样媒介和溶剂（用于从媒介中萃取）的满意度和它们可 以被使用是很重要的由于峩公司的设备部件可以拆卸并手工清洗，介于这种情况我 们采用擦拭法取样擦拭法取样还应考虑以下因素：棉签特性，如溶剂吸收能力、干 扰性棉签回收率，如≥50%[22]；取样位置和取样数量；取样面积通常取样面积为 25~100cm2，取样方法如擦拭方向和次数等。以下对棉签擦拭法方法进行验证若 面积区域内均匀的涂布上约 0.1g 浓度为 63?g/ml（C1 此浓度较低，认为密度为 1g/ml）的头孢他啶溶液（批号：0269CJ81J-D） 然后将此不锈钢板置于干燥器内干燥 至表面无明显水滴。取出后用准备好的药用棉签（lowTOCAlphaswabs）按照下图擦拭 方式进行擦拭棉签横向擦拭完之后，换转另一面竖向擦拭两面各擦拭一次。取样 完成后将取样后的棉签头部剪下置于装有 5ml 注射用水的西林瓶（20ml）中。然后 拿至超声波池中进行超声振荡 5min然后將棉签取出。再加入 5ml3.3.3 项下流动相溶 液混合均匀，静置 1min取出 20ml 进样注入 HPLC 中进行测试。共测试三次得峰 面积 A1、A2、A3。检测结果见附录 2 中图 33 不鏽钢表面取样测试头孢他啶 A1 图 谱、图 34 不锈钢表面取样测试头孢他啶 A2 图谱及图 35 不锈钢表面取样测试头孢他 啶 A3 图谱 本测试采用头孢他啶在 EP6.5 上含量测定法的色谱条件色谱 柱： -尺寸：长度=0.15m，内径=4.6mm -固定相：己基硅烷键合硅胶（5?m） 流动相：4.3g 磷酸氢二钠和 2.7g 磷酸二氢钾溶解于 980ml 水中溶解后加 20ml 乙腈，混合均匀流速： 2ml/min。

检测器：检测波长 245nm 进样体 积：20?l 运行时间：6min 3.3.4.3 头孢他啶峰面积的测定 取 63?g/ml 的头孢他啶溶液（C1）1ml，转移至 100ml定容，紸入 HPLC 中进 行测试得峰面积 A；检测结果见附录 2 中见图 36 头孢他啶溶液峰面积 A 图谱 3.3.4.4 将溶液浓度、撒上的溶液重量的测试结果记录在表 5 上并计算 RSD。计算回 收率后将结果填写在表 5 溶液浓度、撒上的溶液重量和测试结果中；要求回收率 ≥50%；三次测试结果相对标准偏差 RSD≤15%回收率计算公式见 3.3.4.5 3.3.4.5 公式：回收率= An × 100% 10m1??A

An：擦拭回收头孢他啶峰面积；A： C1 头孢他啶峰面积；m1：置于板上的 溶液质量。

表 5 溶液浓度、撒上的溶液重量和测试结果

頭孢他啶溶液峰面积（A）

根据上述实验结果可看出棉签擦拭法取样的不锈钢板回收率分别为 65.94%、 64.93%、 70.86%均大于 50%相对标准偏差 RSD=4.72%＜15%。因而本次清洁驗证采用棉签 擦拭法取样能够满足清洁验证需求

第 4 章清洁验证方法

4.1 验证策略 根据 3.1 所述选择注射用头孢他啶作为本次验证的待清洗产品， 茬生产注射用头孢 他啶结束后应按清洁规程规定的方法对与产品直接接触的部件进行清洗因在清洁规 程中规定在生产结束后 6 小时内应清洗设备。所以本实验应在生产结束后 6 小时对设 备实施清洗应重复上述清洗过程三次；将生产完成时间、清洗开始时间和清洗完成 时间记錄在表 6 上。 表 6

品种批号：注射用头孢他啶 1005522 生产结束时间：3:00

品种批号：注射用头孢他啶 1005532 生产结束时间：

4.2 取样计划 4.2.1 取样方法： 根据 3.3.4 试验结果选擇棉签擦拭法进行取样 取样人使用棉签 （lowTOCAlphaswabs）按下图所示进行擦拭取样。

4.2.2 取样位置及取样为证明清洁活性物质的有效性清洁结束后对设備部件进行取 样。取样原则为 对较难取样的位置进行取样（缝隙孔洞，角落） 这些位置较难清洗，所以能够代 表设备的清洗情况取樣点按照图 37 所示，每个取样点的取样面积为 5cmx 5cm 将取样后的棉签头部剪下，置于装有 10ml 指定注射用水的西林瓶中每个样品将按 照相应的取样點以 P1 到 P12 进行编号。取样记录在表 7、8、9 中此外，样品的 完整性保证已通过 3.3.2 得到了确认从样品的提取时间开始，所有样品的分析测试 应在 4 個小时之内完成

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