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点击联系发帖人 时间：2017-09-20 05:26

trip

我做过类似的连接转化片断是囿点大，但只要操作过程中注意一下应该没问题。我把我的经验交流一下希望会有所帮助：
1.目的基因和载体纯度要高。
2.目的基因和载體酶切要完全这一点很重要，酶切不完全或根本没切开哪肯定影响连接
3.目的基因和载体酶切后要回收纯化，增加其纯度
4.连接最好16度過夜（确定酶没有失活）。不能少于两小时
5.转化时制备好感受态，并同时做阴阳性对照阴性对照为不加DNA只有感受态细胞，独立铺于一個含适量抗生素的平板正常情况下不应有克隆长出；阳性对照加超螺旋质粒DNA和感受态细胞，以计算本次转化效率
6.铺平板时确保抗生素沒有失效！
我做的片段大小为2300bp,按照上述方法转化很成功。

政治敏感、违法虚假信息

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