做Akt的Western blot为什么要做P-Akt和总Akt

点击联系发帖人 时间：2017-07-24 10:55

P图

有没有虫友在做P-AKT/AKTwestern blot的想做心肌细胞 P-AKT/AKT蛋白表达水平，大家的细胞都是现提蛋白跑胶么

要现提，否则p-AKT会丢失

最好的办法就是直接用1XSDS煮了。

我是先用RIPA加磷酸酶抑制剂提后再鼡1XLODING煮不过还没做过P-AKT的western。

要现提否则p-AKT会丢失。

最好的办法就是直接用1XSDS煮了

但很多同学做实验不够仔细，导致在收细胞的过程中就去磷酸化了

直接煮的办法保证他们能做出来。

但很多同学做实验不够仔细导致在收细胞的过程中就去磷酸化了。

直接煮的办法保证他们能莋出来...

那我的细胞是原代贴壁的，非得加RIPA(冰上)操作加磷酸酶抑制剂裂解10min直接加1x loading buffer煮，这样做能保证做出来吧

那我的细胞是原代贴壁的非得加RIPA(冰上)操作加磷酸酶抑制剂，裂解10min直接加1x loading buffer煮这样做能保证做出来吧？...

昨天仍然没做出来怀疑是一抗的问题

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