园艺学报 2018， 45 (2)： 341– ） 芹菜中类胡蘿卜素合成相关番茄红素 ε– 环化酶基因 AgLCYE 的克隆与表达分析 李静文马 静，却 枫王 枫，徐志胜熊爱生*（南京农业大学园艺学院，作物遺传与种质创新国家重点实验室农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，南京 210095） 摘 要： 番茄红素 ε– 环化酶（ lycopene epsilon cyclase LCYE）是类胡萝卜素合成途径中的关键酶。从 ‘津南实芹’ 中克隆获得番茄红素 ε– Ma 等（ 2017）的方法分别取 30、 45 和 60 d‘津南实芹’的叶片和叶柄，将鲜样於研钵中用液氮研磨然后在冷冻干燥机中进行冷冻抽干，称取样品用丙酮提取类胡萝卜素。将提取液用 0.45 μm 滤膜过滤后定容通过超高效液相色谱（ protein 2.4 LCYE 氨基酸的理化性质和亲 /疏水性分析 对不同植物来源的 LCYE 蛋白进行理化性质和组成成分分析，结果见表 1 LCYE 蛋白的氨基酸数在 516 ~ 546 之间，相对分子质量为（ 57 ~ 61 kD） 理论等电点（ pI） 5.71 ~ 7.87。酸性氨基酸（包括天冬氨酸和谷氨酸）与碱性氨基酸（包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸）含量基夲相同为 12%左右。脂肪族氨基酸含量相对较高为 23%左右。芳香族氨基酸含量相对较低为 10%左右。除了黄瓜、牵牛花和甘薯中 LCYE 属疏水性蛋白の外其他均 为负值，属亲水性蛋白结果表明不同物种的 LCYE 蛋白氨基酸理化性质相似。 通过 DNAMAN 5.0 对芹菜中的 AgLCYE 蛋白进行亲 /疏水性分析结果表明，芹菜 AgLCYE蛋白为亲水性蛋白 其中疏水性最强的位置是第 492 位亮氨酸 （ Leu） ， 其次为第 112 位颉氨酸 （ Val） 亲水性最强的位置是第 441 位赖氨酸（ Lys） 。 2.5 芹菜 AgLCYE 蛋白无序化分析和三级蛋白结构的预测 利用 FoldIndex 程序对芹菜中 AgLCYE 蛋白的无序特征进行测定结果显示， AgLCYE 蛋白编码的氨基酸序列在芹菜中有 4 个无序化区域其中包含一个有 52 个氨基酸组成的长无序化区域， 氨基酸序列为 30、 45 和 60 d） ‘津南实芹’叶中的叶黄素和 α–胡萝卜素含量进行测定。从图 4 可以看出芹菜叶片和叶柄不同生长时期均没有检测到 α–胡萝卜素的存在。叶黄素含量如图 5 所示，芹菜叶片中叶黄素的含量均高於叶柄芹菜叶片和叶柄中，叶黄素含量均在 45 d 时最低 30 d 时最高，其中叶柄中 30 d 时叶黄素含量约是 45 d