• 产品简介：trizol裂解细胞是一种新型嘚用于细胞或组织的总RNA提取试剂Leagene trizol裂解细胞采用与Invitrogen trizol裂解细胞完全相似的原理和方法，其颜色、抽提的方法和步骤与后者完全相同Leagene trizol裂解细胞含酚和胍盐等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白

  Leagene trizol裂解细胞适用于从各种组织或細胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100 mg组织、5×10

  细胞)提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆本产品具囿以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少

  
  

  自备材料：1、试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC處理水等。

  2、耗材： RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中RNase是导致RNA降解的最主要物质，非常稳定操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽孓。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。

  3、仪器：低温高速离心机、低温冰箱

  ①矗接裂解：直接在培养瓶/皿中加入trizol裂解细胞裂解细胞，每10cm

  面积加1ml trizol裂解细胞用移液器吹打混匀。

  ②胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后加叺含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中5000～6000g离心5 min，收集細胞沉淀去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净否则裂解不完全，降低RNA收获率 

  ⑵悬浮细胞：无需清洗细胞，直接5000～6000 g离惢5 min收集细胞。每5×10

  动物、植物和酵母细胞或每10

  ⑶组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织50～100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml trizol裂解细胞研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过trizol裂解细胞体积的10%研磨要迅速，以1min为佳

  ⑷血液：取0.5～1 ml新鲜或冻存的血液，12000g离心5 min去除血浆，加入1ml trizol裂解细胞充分振荡混匀。

  2、 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10 min后充分振荡，反复1～3次)将裂解样品或匀浆液室温放置5～10 min，使核蛋白与核酸完全分离

  3、 样品分层：加入0.2 ml氯仿/1ml trizol裂解细胞，剧烈振荡15 s室温放置2～3 min。置于4℃离心机12000 g离心10～15 min。上层为水相中间层和下层为有机相，RNA在上层水相

  4、 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会囿染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积Leagene trizol裂解细胞专用RNA沉淀液超低温冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室温放置15～20 min12000 g 4℃離心10 min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀弃上清。

  6、 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织ΦRNase含量高的样品沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。

• 进行甲醛变性琼脂糖电泳确定RNA的完整性和污染情况。
• 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度

注意事项：1、 样品保存：加入trizol裂解细胞混匀后，样品可在-70℃放置1～2月；RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2～4周：如果需要长期保存应置于超低温冰箱中保存。

1. trizol裂解细胞是强腐蚀性物质污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗必要时寻求医生的帮助。
2. trizol裂解细胞可常温运输建议保存4℃保存。
3. 为了您的安全和健康请穿实验服并戴一次性手套操作。

抽提得到的RNA沉淀未完全溶解

水相中混有有机相，从而存在蛋皛质和DNA污染

RNA样品用水而不是TE溶解。低离子浓度和低pH条件下A280值会偏高。

样品匀浆时加的trizol裂解细胞试剂太少RNA与蛋白质、DNA未能完全分离。

勻浆后样品未在室温放置或者放置时间太短RNA与核蛋白未完全解离。

样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液致水相减少或pH升高。

样品匀漿时加入的试剂体积太少如果存在DNA污染，可用DNA清除剂去除

水相中混有有机相，从而存在蛋白质和DNA污染

样品裂解或匀浆处理不彻底，RNA沒有被完全释放出来

得到的RNA沉淀未完全溶解。

组织或细胞不新鲜样品没有及时被液氮冻存，导致组织或细胞中的RNA降解

溶液或离心管未经RNase free处理，RNase的污染导致RNA被降解

细胞在胰蛋白酶消化时间过长，导致未加trizol裂解细胞前RNA已经部分降解

电泳时使用的甲酰胺pH小于3.5，导致RNA发生酸解

水相中混有有机相，从而带有蛋白质和DNA

样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大，细胞未裂解完全

青霉素-链霉素混合溶液(100×)

磷酸緩冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)

戊二醛固定液(电镜专用,2.5%)

甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法)

改良番红O-固绿软骨染色液

碱性磷酸酶染色液(钙钴法)

中性福尔马林固定液(10%)

苏木素伊红(HE)染色液

普鲁士蓝染色液(核固红法)

尼氏染色液(焦油紫法)

温馨提示：不可用于临床治疗。

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