实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
实验十六 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用5下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩1页未读，继续阅读
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢维生素的测定
维生素的测定
17.2.1 概述[2,3]
维生素广泛存在于各种生物体中，其种类繁多，化学结构与生理功能各异。因此无法按照结构或功能分类，按其溶解性可分为脂溶性(VA、VD、VE、VK)和水溶性(VB1、VB2、VB6、VB12 、VP、VPP 、VC)两大类。维生素是人体生命活动不可缺少的营养物质，它们一般在动物和人体内不能合成或合成数量少，满足不了动物和人体的需要，必须依靠从食物中摄取。在食物中缺乏了任何一种维生素，人和动物都会发生特有的缺乏症状，如缺乏维生素A、B和C 时，可分别引起夜盲症、脚气和坏血病等，严重时足以致命。某些维生素含量的高低，是评价农产品品质的重要指标之一。
维生素的分析是一项比较复杂的工作。其样品分析的一般程序是：①用酸、碱或酶分解样品，使其中的维生素游离出来；②用溶剂进行提取；③分离干扰物质，对样液进行分离提纯；④用适当的方法进行定量等。维生素的测定方法，有微生物学测定法、生物学测定法等。
仪器分析的方法有分光光度法、荧光分析法、薄层层析法、高效液相色谱法等。维生素的分析方法很多，选用方法时应根据样品的品种、类型、待测维生素的性质、含量以及干扰物质多少等因素来决定。下面重点介绍维生素C、维生素B 1和B2以及作为维生素A原的b-胡萝卜素的测定。
维生素C又称抗坏血酸，其纯品为白色无臭结晶，熔点为190~192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂，在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件下较稳定。还原型(L-抗坏血酸)可被氧化为氧化型(L-脱氢抗坏血酸)，还有一定的生理作用，如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。总抗坏血酸包括还原型、氧化型抗坏血酸和2,3-二酮古乐糖酸。
根据它具有的还原性质可以测定VC的含量。常用的测定方法有2,6-二氯靛酚法、2,4-二硝基苯肼法、铅-硫化氢法、碘酸法以及荧光分光光度法。2,6-二氯靛酚法用于测定还原型VC，其它方法多用于测定总VC的含量。
17.2.2 还原性维生素C的测定
抗坏血酸(VC)结构中有烯二醇结构存在 ，因此具有还原性，能将蓝色染料2,6-二氯靛酚还原为无色的化合物，VC则被氧化为脱氢VC，反应式如下：
&还原型VC&&&&&& 氧化型2,6-二氯靛酚&&&&&&&&& 脱氢VC&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 还原型2,6-二氯靛酚（无色）
2,6-二氯靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性，在碱性介质中呈深蓝色，而在酸性介质中呈浅红色(变色范围pH4~5)，其氧化态时呈深蓝色(碱介质中)或浅红色(酸性介质)，还原态时为无色。根据这个特性，用碱性蓝色染料的标准溶液滴定植物样品酸性浸出液中VC到刚变浅红色为终点，由染料的用量即可计算VC的含量。滴定终点的红色是刚过量的未被还原的(氧化型)染料溶液在酸性介质中的颜色。
通常测定VC浸提和测定都是在20g·L-1的草酸溶液中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免VC在pH高时易被空气氧化()。此染料不致氧化待测液中非VC的还原性物质，所以对VC的测定有一定的选择性。
本法适用于测定一般水果、蔬菜样品的还原型VC，不包括脱氢VC。如样品中含有Fe2+、Sn2+、Cu2+、SO32-、S2O32-、SO2等还原性杂质，则有干扰。
高速组织捣碎机(8000~12000r·min-1)；电动离心机(4000r·min-1)； 半微量滴定管。
1.& 20g·L-1草酸溶液：称取草酸(化学纯)20g溶于水中，稀释至1L，贮于避光处()
2.& 60g·L-1 KI溶液。
3.& 10g·L-1 淀粉指示剂。
4.& 0.1000& mol·L-1 (1/6 KIO3)标准液：称取在105℃烘过2h的碘酸钾(KIO3 ，优级纯)1.784g溶于水，定容至500mL 。此为0.1000 mol·L-1 (1/6 KIO3)贮备液。使用时将此贮备液用煮沸并冷却的水稀释100倍，即成0. 0010 mol·L-1 (1/6KIO3)标准溶液。大约每星期应稀释配制一次。
5.& VC标准溶液：称取维生素C(C5H8O5，分析纯) 20.0mg溶于20g·L-1草酸溶液，并用20g·L-1草酸稀释至100mL，此液约含VC& 0.2mg·mL-1，置于冰箱中保存。临用前当天进行标定。
VC的标定：吸取VC液5.00mL于50mL三角瓶中，加入20g·L-1草酸溶液10mL，60 g·L-1KI溶液0.5mL，10 g·L-1淀粉溶液5滴，用0.1000 mol·L-1 (1/6 KIO3)标准液滴定至溶液突变为浅蓝色为止(约需滴定11mL)，计算VC的准确浓度：
VC溶液浓度，mg·mL-1= c V1×88/V2
式中& c —所用(1/6KIO3)标准溶液浓度(mol·L-1)；
&&&&&&&V1—所用(1/6KIO3)标准溶液的体积(mL)；
&&&&&&&V2—所用VC溶液的量(mL)；
&&&&&&&88—维生素C(1/2 C5H8O5)的摩尔质量() (g·mol-1)；
6.& 2,6-二氯靛酚溶液：称取2,6-二氯靛酚(分析纯)50mg溶于约200mL含有NaHCO3(分析纯)52mg的温水中(& 40℃)，冷却后用水稀释至250mL。用玻璃滤器或折迭滤纸滤于棕色瓶中，保存在冰箱中。使用前，待溶液恢复至室温后，用VC标准溶液标定其准确浓度。在冰箱中保存时，每周标定一次()。
标定方法：吸取已标定的VC标准溶液5.00mL(含VC约1mg)于50mL三角瓶中，加入20 g·L-1草酸溶液10mL，摇匀，用2,6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色，约在15s不褪色为止(应用染料溶液约10mL)。计算每毫升染料溶液相当于VC的mg数，即滴定度T(应约为0.1mg·mL-1 Vc)：
&&&&T= c×V1/V2
式中&&& c—所用Vc标准液的浓度(mg·mL-1)；
&&&&&&&&&V1—所用Vc标准液的体积(mL)；
&&&&&&&&&V2—所用染料溶液的体积(mL)。
1. 样品处理：
&(1) 新鲜果蔬样品：称取鲜样50.0~100.0g，放入组织捣碎机的杯中，加入等重量的20 g·L1草酸浸提剂，快速捣碎1min，将样品打成浆状。样品处理的整个过程应在10min中内完成，以免Vc被空气氧化。用小烧杯称取浆状物10~30.×g(含还原型Vc 1~5mg)，放入100mL容量瓶中，用20 g·L-1草酸溶液定容，若有泡沫可加2滴辛醇除去。过滤，若滤液色深，影响滴定终点的判定时，可加1~2勺白陶土脱色()不易过滤，可用离心机分离。
(2) 多汁果蔬样品：可用纱布压汁后脱脂棉花快速过滤，量取10~20mL汁液，立即用20 g·l-1草酸溶液定容至100mL。
(3) 干样品：称取1~4.×××g(含还原型Vc 1~5mg)放入研钵中，加入20 g·L-1草酸溶液研磨成浆状液，洗入100mL容量瓶中，用2 0g·L-1草酸定容。
(4) 含有还原性物质的样品：含有较多Fe2+的样品可用80mL ·L-1醋酸代替20 g·L-1草酸作为浸提剂。亚硫化脱水样品，可于稀释至一定容量之前加入20mL丙酮，以除去SO2的干扰。
2. 样品的测定：吸取以上制得的无色滤液5.00~10.00mL(使含VC约0.2~1mg范围)放入50mL三角瓶中，用棕色半微量滴定管中装的2,6-二氯靛酚标准溶液滴定至浅红色，约在15s内不褪色为终点()。同时以浸提剂做空白试验(空白值约0.08~0.10mL)。
&&&&&&&&&&&&& 还原型Vc含量& (mg·kg-1)=(V-V0)×1000×T / m
&&& 式中&&& V—滴定样品液所用染料溶液量(mL)；
&&&&&&&&&&&&&V0—滴定空白所用去染料溶液量(mL)；
&&&&&&&&&&&&T—染料溶液的滴定度；
&&&&&&&&&&&&&m—滴定时样品溶液中样品的质量(g)。
两次测定结果允许误差：&&&&
&&&&&&样品还原型Vc含量，mg·kg-1&&& 允许误差，mg·kg-1
&&&&&&&&&&&&&100&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 5.0
&&&&&&&&&&&&&100~1000&&&&&&&&&&&&&&&&10.0
注1. 偏磷酸是Vc的最佳稳定剂，且具有沉淀蛋白质的作用。但其价格较贵，在室温下放置易转化为正磷酸，降低对Vc的稳定性。草酸廉价易得，有与磷酸相近的稳定性。而醋酸适于浸提含有Fe2+的样品。
注2. 草酸不应置于日光下，以免产生过氧化物。当有催化剂(如Cu2+)存在时，过氧化物能破坏Vc。
注3. KIO3与还原Vc的主要反应如下：
IO3- + 5I- + 6H+ ===== 3I2 + 3H2O
I2&+ C6H8O8&===== C6H6O8&& +&2I-& &+&2H+
从上述反应式可知1mol(1/6 KIO3)与1mol(1/2C6H8O8)完全反应，故1/2 C6H8O8的摩尔质量为88g·mol-1。
(注4) 2,6-二氯靛酚固体试剂有时含有分解产物，染料溶液长久贮存时也会生成分解主物，从而使滴定终点不敏锐，因此应在使用前检查。检查方法：取15mL染料溶液加入过量的Vc溶液，若还原后的溶液带有颜色，表示此溶液已不能使用。
(注5) 使用白陶土时，要对每批新的白陶土测定对Vc的回收率。
(注6) 样品中可能有其它还原性物质也可使染料还原。但其还原染料的速度较慢，故滴定终点以浅红色在15s不褪色为准。
17.2.3 维生素C总量的测定(2,4-二硝基苯肼比色法)
维生素C总量包括还原型Vc、脱氢型Vc和二酮古乐糖酸，将样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸，进一步水解为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎。其呈色的强度与二酮古乐糖酸浓度成正比，可以比色定量。
1. 10 g·L-1草酸，20 g·L-1草酸；
2. 酸处理活性炭：取活性炭200g，加入1∶9HCl 1000mL，煮沸后，抽气过滤，再用沸水1000mL煮沸过滤，重复用水洗至溶液中无Fe2+离子(用10 g·L-1KSCN溶液试验无红色)，放在100~120℃烘干。
3.& 20 g·L-1& 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼(分析纯)2.00g溶解于100mL 4.5mol·L-1 H2SO4中。
4.& 4.5mol ·L-1 &H2SO4溶液：量取浓H2SO4(分析纯)250mL，慢慢倒入750mL水中，边加边搅拌。
5.& 100 g·L-1硫脲溶液： 用500mL·L-1酒精溶液溶解5.00g硫脲(分析纯)，使其最终体积为50mL。
6. H2SO4(9∶1)溶液：量取浓硫酸90mL，慢慢倒入10mL水中。
7. 标准Vc溶液：称取维生素C(C6H8O5，分析纯) 20mg溶解于10 g·L-1草酸溶液中，移入100mL容量瓶中，并用10 g·L-1草酸溶液定容。吸取此溶液50mL，加入活性炭0.1g，摇1min，过滤。吸取此溶液5mL于100mL 容量瓶中，用10 g·L-1草酸溶液稀释定容。此Vc工作液为10mg·mL-1。
1. 样品处理：称取适量样品(m)加等重量的20 g·L-1草酸溶液，在组织捣碎机中打成浆状。取浆状物20g用10 g·L-1草酸溶液移入100mL容量瓶中，定容过滤。
2. 样品中总Vc的测定：取滤渡10mL，加入10 g·L-1草酸10mL(总Vc约1~10mg·mL-1)，加一勺活性炭。摇1min，静置过滤。
各取滤液2mL于样品管和样品空白管中，各管加入1滴硫脲溶液()。于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5mL，两管都加上盖子，置于37℃保温箱中保温3h。
然后取出样品管放入冰水中(终止反应)。样品空白管取出后冷却至室温，然后加入2,4-二硝基苯肼0.5mL。
然后在样品管和样品空白管皆置于冰浴中，从滴定管中滴加9∶1硫酸溶液2mL于各管中，边滴边摇试管(防止溶液温度上升，溶液中糖炭化而转黑色)。
将各管从冰浴中取出，在室温下放置30min后()，立即在分光光度计540nm 波长比色，读取吸收值，根据吸收值从标准曲线查出相应含量。
3. 标准曲线的绘制：吸取Vc标准工作液10，20，30，40，50mL稀释至50mL，即此系列含有2，4，6，8，10mg·mL-1的Vc标准溶液。各取2mL于各标准管中，以下操作步骤同上样品测定。以上述Vc浓度系列为横座标，以吸收值(A)为纵座标作标准曲线。
&&&&&&&Vc总量(mg·kg-1 ) = r×20×=r×20
式中&&& r—从标准曲线查得的总抗坏血酸的含量(mg ·mL-1)；
&&&&&&&&20—样品稀释倍数[(2m/m)×(100/20)×(20/10) = 20 ]；
&&&&&&&&1000—分别代表1000g样品中总Vc的含量和将mg换算成mg。
注1. 硫脲可防止Vc被氧化，且可帮助脎的形成，最终溶液中硫脲的浓度应一致，否则影响色度。
注2. 加入H2SO4(9∶1)溶液后试管从冰水中取出，溶液颜色会继续变深，所以必须准确加入H2SO4后30min内比色。
17.2.4 维生素B1和维生素B2的测定（液相色谱法）
维生素B1又名硫胺素，作为抗脚气病因素和抗神经炎因素，早已为人们所知[4]。它常以游离态、或作为焦磷酸盐存在于自然界中。它是熔点为246~250℃的白色结晶，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚和氯仿。硫胺素遇氧化剂或还原剂很不稳定，在干燥时较耐热，在酸性条件下(pH3.5)不易分解，在碱性条件下易分解。维生素B1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆、绿色蔬菜和牛乳、蛋黄、肝脏、猪肉中比较丰富，动物组织不如植物组织丰富。一般天然物中的维生素B1不但有游离型的，而且也有结合型的，在农产品中它常与淀粉、蛋白质结合在一起，要进行各种相应的前处理，使其成为游离型后，才可以进行测定。维生素B1可用灵敏度较高的硫色素荧光法[2,3,4,5,8,9]，紫外分光光度法、偶氮染料比色法和荧光目测法[8]等进行测定。
维生素B2又名核黄素、乳黄素，作用名为促进生长因素。它是橙黄色针状结晶，熔点为282℃的，耐热，对空气、氧气稳定，微溶于水，其水溶液呈黄绿色荧光，在强酸性和碱性溶液中则充分溶解。在酸性溶液中即使加热也很稳定，而在碱性溶液中则不稳定，特别是具有遇光易分解的性质。维生素B2在自然界中较多地存在于酵母、肝脏、蛋、牛乳、肉类中，在天然物中维生素B2不仅有游离型，还有与核酸结合在一起的。测定时要经适当的前处理，使其分离后进行测定。维生素B2的测定方法有分光光度法[8]、核黄素荧光法和光黄素荧光法[2,3,4,5,8,9]等。
随着仪器分析技术的发展，液相色谱法也应用于同时测定维生素B1和维生素B2，下面就此方法进行介绍。
样品在稀盐酸溶液中经消化，用淀粉酶和木瓜酶分解样液中的淀粉和蛋白质后，即得到维生素B2的测定样液。此溶液在碱性铁氰化钾溶液中氧化后用异丁醇提取所得维生素B2测定样液。然后用YWG-C18柱乙晴-磷酸盐缓冲溶液作流动相，以荧光检测器进行液相色谱法测定，求出样品中维生素B1和维生素B2的含量。
1. 液相色谱仪：具有：?荧光分光检测器和记录仪；?色谱柱：不锈钢柱长为250mm，内径3.8mm。淤浆法填装YWG-C18H37 10m固定；
2. 微量注射器：5mL 和10mL。
1. 乙晴和异丙醇，分析纯，重蒸；
2.& 0.025mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH=7.4)；
3. 流动相：流动相A，以磷酸盐缓冲液80份和乙晴20份相混而成；流动相B，以磷酸盐缓冲液82份和乙晴18份混合而成。
4. 碱性铁氰化钾溶液：吸取150g·L-1氢氧化钠溶液97mL加入10 g·L-1铁氰化钾3mL混合而成；
5. 混合酶溶液：取淀粉酶和木瓜酶各3g，用2 mol·L-1醋酸钠溶液稀释至100mL；
6. 维生素B1标准溶液：用0.01 mol·L-1盐酸溶液将符合药典的盐酸硫胺素配制成100mg·L-1 的标准溶液；
7. 维生素B2标准溶液：用0.01 mol·L-1盐酸溶液将符合药典的核黄素配制成25mg·L-1 的标准溶液；
8. 维生素B1和维生素B2混合工作液：取上述维生素B1和维生素B2标准溶液用0.01 mol·L-1盐酸溶液稀释至含维生素B1和维生素B2各2mg·L-1 的标准溶液。
1. 样品处理：固体样品粉碎过20目筛，果蔬、肉类有水产品经捣碎备用。
称取试样1.00g(维生素B1和B2含量不低于0.5mg)于50mL棕色容量瓶中，加入0.1 mol·L-1盐酸溶液35mL，在超声波浴中超声3min或转动摇匀，在高压灭菌锅内121℃保持20~30min或置于沸水浴中加热30min，然后轻摇数次。取出，冷却至40℃以下，分别加混合酶液各2.5mL，摇匀，置于37℃下过夜或42~43℃加热4h，冷却，用水定容。样液经每分钟3000转速度离心过滤，取约10mL滤液备用。然后取滤液直接进行维生素B2测定()。
取上述滤液5mL于60mL分液漏斗中，沿分液漏斗壁加碱性铁氰化钾溶液3mL(边摇边加)，继续振摇10s，立即加入异丁醇8mL，并猛烈振摇45s，静置分层后弃去水层。有机相通过无水硫酸钠小柱，其收集液为维生素B1待测液。
2. 标准溶液制备：准确吸取2mg·L-1维生素B1和维生素B2混合工作液0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mL于50mL棕色容量中，再加入与样品等量的0.1mol·L-1盐酸，以下操作同样品处理，得到维生素B2标准系列水溶液和维生素B1标准系列异丁醇溶液。
3. 样品测定：
维生素B1的测定：首先调整液相色谱仪中激发波长为435nm，狭缝为10nm，发射波长为375nm，狭缝为12.5nm，灵敏度为10。使用流动相A，流速1mL·min-1。然后用微量注射器吸取标准系列溶液和样液为4mL或8mL()，注入液相色谱仪中，得到其出峰保留时间和峰高。
维生素B2的测定：首先调整液相色谱仪中激发波长为440nm，发射波长为565nm，狭缝与维生素B1相同，灵敏度为3。使用流动相B，流速1mL·min-1。然后用微量注射器吸取标准系列溶液和样液为5mL，注入液相色谱仪中，得到其出峰保留时间和峰高。
由于采用等容量进样，以标准系列的峰高为纵座标，标准系列的维生素B1或B2含量(mg) 为横坐标作标准曲线。
维生素B1 或B2(mg·kg-1 )= m1 / m
式中： m1—由标准曲线查得相当于标准维生素B1或B2的质量(mg)；
&&&&&&&m—进入色谱内相当样品质量(g)。&&&&&
注1. 维生素B2 测定用消化后的滤液直接进样，处理后的标准和样品都有杂质峰，但能分离维生素B2，不影响测定。
注2. 由于维生素B1 被碱性铁氰化钾氧化并不是定量产生硫色素，但在恒定条件下是一个恒量。用异丁醇萃取的维生素B1 也是如此。因此本法采取等体积进样。
17.2.5 以b-胡萝卜素的测定
胡萝卜素是具有类似维生素A的生物活性和效力的物质，称维生素A原。胡萝卜素常有a、b、g几种异构体，其中以b-胡萝卜素的生理效能最大。在动物的小肠内、肝脏中转化为维生素A。结构式如下：
b-胡萝卜素
由此可见，一分子的胡萝卜素可分为二分子的维生素A，在实际效能上，一分子的胡萝卜素只相当于一分子的维生素A。胡萝卜素是脂溶性物质，易氧化，对热、酸不稳定。在紫外光照射下分解。但是在惰性气体中加入适当的抗氧化剂(如维生素E)，则可提高稳定性。
b-胡萝卜素是植物色素。存在于谷物、蔬菜、水果等食物中。以每百克可食部分计，小米0.12mg、玉米0.34mg、玉米面0.13mg、黄豆0.40mg、黄豆粉0.48mg、绿豆0.22mg、毛豆0.23mg。
因b-胡萝卜素是有色色素，可采用直接比色法定量分析。
1. 水饱和正丁酮：5份正丁酮与1~2份水在分液漏斗中用力地进行摇动，静置分层，取上清液备用。
3. b-胡萝卜素标准溶液：称取0.0250g粉末状的b-胡萝卜素置于已加入乙醚的带磨口瓶塞的100mL容量瓶中，使之溶解并稀释至刻度。取出20mL置于装有水饱和正丁酮的250mL容量瓶中，定容摇匀。再从中取出25mL用水饱和正丁酮稀释至100mL，即得5mg·mL-1的b-胡萝卜素标准溶液。
用水饱和的正丁酮萃取样品中的胡萝卜素，通过比色，求出样品中胡萝卜素含量(以b-胡萝卜素计)。
1. 样品的制备和测定：取10.××g研磨过的样品悬浮于装有50mL澄清的水饱和正丁酮的200mL三角瓶中(使无块状物存在)，加塞，用力振荡1min。在室温条件下暗处放置一夜。次日晨，对沉淀物再进行充分摇匀。然后在遮光条件下通过细孔折叠滤纸漏斗过滤入另一个200mL三角瓶中。过滤时，为了避免蒸发损失，漏斗颈部下端要贴紧三角瓶瓶壁，并用表玻璃盖住漏斗。吸取黄色滤液于分光光度计425nm处比色测定()，并在标准曲线中查出相应的b-胡萝卜素值(A)。
2. 标准曲线的绘制：分别吸取5mg·mL-1 b-胡萝卜素标准溶液0、 0.5、 1.5、 2.0、 2.5、 3.0 mL标准液于10mL带磨口塞的容量瓶中，用水饱和正丁酮定容摇匀，得0.0，0.25，0.75，1.00，1.25，1.50mg·mL-1 b-胡萝卜素标准溶液系列。于分光光度计425nm处比色测定。然后以吸光值为纵座标，以每1mL溶液所含的b-胡萝卜素量为横座标绘制标准曲线。
&胡萝卜素含量[] (以b-胡萝卜素计，mg·kg-1) = r·V / m
式中：r—从标准曲线查得b-胡萝卜素的含量(mg·mL-1 )；
&&&&&&V—浸提液的体积(mL)；
&&&&&&&m—样品的质量(g)。
注1. 若有其它色素干扰测定，可参考鲍士旦主编， 1996，《农畜水产品品质分析》，中国农业出版社，438~442。
注2. 胡萝卜素与维生素A的换算关系为：每3mg维生素A(醇型)或3.44mg 维生素A(酯型)=10000 I.U. (国际单位)，即1I.U. 维生素A=0.6mg b-胡萝卜素=0.3mg维生素A(醇型)。
发表评论：
TA的最新馆藏[转]&[转]&[转]&[转]&[转]&[转]&您所在位置： &
&nbsp&&nbsp&nbsp&&nbsp
实验六维生素C的定量测定.doc6页
本文档一共被下载：
次 ,您可全文免费在线阅读后下载本文档。
文档加载中...广告还剩秒
需要金币：150 &&
实验六维生素C的定量测定.doc
你可能关注的文档：
··········
··········
姓名：郭沈杰 年级专业：2012级生物科学 同组者：蔡萍萍
学号：1座机电话号码12
实验六 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）
一、实验目的
掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
二、实验原理
维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐。本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。若无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。
三、实验仪器
1、新鲜水果
2、电子分析天平
5、滴定装置
四、实验试剂
1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。
2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。
3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.
4、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。每次临用时，以标准抗坏血酸液标定。
五、实验步骤
（一）样品中抗坏血酸的提取：
1、将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。
2、称取5.0g，加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。
3、称取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分
正在加载中，请稍后...vc含量测定_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
vc含量测定
上传于||暂无简介
阅读已结束，如果下载本文需要使用1下载券
想免费下载本文？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢百度拇指医生
&&&普通咨询
您的网络环境存在异常，
请输入验证码
验证码输入错误，请重新输入}