细胞代谢组学培养中胰蛋白酶不去除，为什么不影响细胞代谢组学贴壁

点击联系发帖人 时间：2016-08-27 07:41

细胞代谢组学

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新接触细胞代谢组学代谢组学想请教一下，药物干扰细胞代谢组学一般要设计几个浓度点依据是什么？还是直接选择一个最适的这个最适浓度又是怎样选择？

不知道邀请谁试试他们

政治敏感、违法虚假信息

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清洁级SD大鼠乳鼠若干，购于第彡军医大学动物实验中心

二、主要仪器及试剂1、主要实验仪器

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细胞代谢组学及培养液样本收集參考步骤
本方法适用于细胞代谢组学代谢组学测试LC/MS & GC/MS
1、玻璃试管 (配瓶盖)：1 支/每样品
2、样品瓶 (配瓶盖)：2 支/每样品（1 支装培养液1 支装细胞代谢組学破碎离心后上清液）
3、15 ml 离心管：2 支/每细胞代谢组学状态差的样品（1 支装培养液，1 支装PBS 洗液）
4、1.5 ml 离心管：1 支/每样品（培养液取样用如果培养液不需要做检测，可以不用）
二、细胞代谢组学破碎及代谢物提取：
1. 从培养箱中取出培养皿显微镜下观察细胞代谢组学状态。
(1) 细胞代谢组学状态不差；
(2) 细胞代谢组学状态差有较多悬浮，贴壁不牢
2.收集贴壁不牢的细胞代谢组学：
做代谢组检测的话，此步可以省去）；
(2) 用原培养液吹打细胞代谢组学把贴壁不牢的细胞代谢组学全部吹打下来，收集全部培养液于15 ml 离
心管离心，取出1.5 ml 培养液于EP 管中剩餘培养液丢弃（如果培养液不做代谢组检测
的话，离心后可以全部丢弃）保留离心得到的细胞代谢组学（管1）。
3. 收集贴壁牢的细胞代谢組学：
(1) PBS 冲洗细胞代谢组学洗去残留在皿中培养液：一次1 ml，洗6 次至肉眼无色。洗液保留
到另一离心管（管2）离心，保留细胞代谢组学；
(2) 加1 ml PBS 溶液到皿里散布均匀，用细胞代谢组学刮刀刮下细胞代谢组学向同一位置刮，吸取细胞代谢组学
悬液到玻璃离心管（管3）；另取0.5 ml PBS 溶液到皿里冲洗残余细胞代谢组学，尽量全部吸取到离
心管中得到1.5 ml 细胞代谢组学悬液于玻璃试管（管3）中。
(3) 用管3 中的1.5 ml 细胞代谢组学悬濁液将管1 和管2 中的细胞代谢组学团汇总到管3 中。
(4) 混合液移入2ml 离心管离心，保留细胞代谢组学‐80℃冻存，干冰寄送
细胞代谢组学量：10^7 ，一次不够可将多次合并，必须保证足够的量！

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