3 3 5 5 四甲基联苯胺指示剂配出来颜色偏黄是为什么？
全部答案（共1个回答）
恐怕是被氧化成类似于肼的结构了吧，四甲基联苯胺很容易被氧化的，尤其是在有酶的时候。
就像苯酚可以被氧化成醌一样，形成了大的共轭体系，导致出现颜色并进一步变深。
--原因是缺色
一般表现为缺红色（图像呈青色）或绿色（图像呈紫色），或蓝色（图像呈黄色），少数可能是颜色混乱，但图像细节清晰。如果在这种情况下，我们长时间的使用...
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答: 人在呼吸时吸入的二氧化碳有坏处吗？
答: 我是高中生，我认为化学的教育的话让人理解的同时一定要让化学的实验设备跟上，这样的话会让人更加深刻。还有的就是课外的知识老师一定要多言传身教，更多的知识对考试是相...
答: 白糖和香灰混合后可以点燃，因为香灰中的锂化物能催化白糖氧化
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这个不是我熟悉的地区粪便隐血试验_百度百科
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粪便隐血试验
粪便隐血试验对消化道出血的诊断有重要价值，现常作为消化道早期诊断的一个筛选指标。正常人24h的胃肠道生理性失血量约0.6ml，用高灵敏度的化学法（可检出1ml以上）一般也难以检出；用灵敏度更高、特异性强的免疫学方法有时可出现假阳性，故值得注意。阳性：在消化道溃疡性出血时呈间断性阳性；而消化道癌症时呈持续性阳性，因此可作为良、恶性出血的一种鉴别。阳性还见于肠结核、、、、肾出血综合症等。
粪便隐血试验简介
【释义】：临床常用的化验方法之一。用化学试验来检测粪便中微量的、肉眼看不到的血液。正常结果为阴性。者可见于胃肠道出血等。试验前几天如进食过含叶绿素食物、动物血以及含铁药物等，亦可出现假阳性。
【原理】：隐血是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜均不能证实的出血。血红蛋白中的含铁有催化分解的作用，能催化试剂中的，分解、释放新生态氧，氧化色原物质而显色。显色的深浅与血红蛋白的含量呈正相关。
粪便隐血试验检测方法
粪便隐血试验传统方法
传统方法的含义：还原法 联苯胺法 法无色法 愈创木
原理：血红蛋白中的有酶活性，可催化，放出新生态氧，将受体试剂氧化并显色。
优点：结果显示快、清晰，结果可以。
缺点：A.特异性差，受饮食影响大。含的食物和药物对结果有干扰，30%。隐血检查前，指导患者应避免服用铁剂、动物血、肝类、瘦肉以及大量绿叶蔬菜3天，如有，勿咽下血性唾液，以防呈。
B.敏感度低，出血量&90μg/ml才能检出。
C.方法学限制条件多：患者提前准备时间长。由于取材部位不同，反应时间不同，对显色的判断不同，故在同一方法的试验中，也可产生误差。
粪便隐血试验全新方法
全新方法的含义：法（家用型）——准确、快速、有效鉴定人粪便中是否含有隐血
原理：试纸上包被一层四甲基联苯胺和膜，在马桶或便池内，粪便中的血红蛋白、可扩散到周围的水中，血红蛋白中的有类似的活性，能通过过氧化物膜释放出氧，将无色的四甲基联苯胺氧化成有色的兰，呈蓝绿色显出。
优点：A.不用采集和处理粪便，避免病菌感染，更健康、更安全
B.无需特殊准备，试纸直接投入马桶或便池，简单易行
C.检测过程只需几分钟，随时可恶进行检测，节约时间与成本
D.2分钟迅速出检测结果，灵敏度高（0.2ug/ml，微量出血即可检出）
E.无饮食限制，避免假阳性
F.无需多点取样，解决样本采集不规范的问题，避免（避免漏诊）
G.全球最简便的检测方法；唯一获得美国（食品和药物管理局）认证的家用便隐血检测技术；唯一经中国SFDA（国家食品药品监督管理局）审批的真正适合家用的便隐血检测产品
粪便隐血试验方法学总结
全新方法——（家用型）在早期消化道筛查中应用最为安全、方便，无需接触粪便是该方法的重要改良，相比取粪便进行检测的方法（传统化学法），更具科学性，可有效避免多点取样的不规范性，有效避免漏诊。改良后的全新方法敏感性更高，尤其适合受检人群家用自检，有效提高早期消化道恶性肿瘤的，减少死亡率。
【参考值】：阴性
【临床意义】：对鉴别有一定意义，，阳性率为40%~70%，呈间歇阳性；消化道恶性肿瘤，如胃癌、结肠癌，阳性率可达95%，呈持续性阳性；、、克罗恩（Crohn）病、、及等，FOBT均常为阳性。关注今日：53 | 主题：338836
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【求助】请教联苯胺法大便隐血试验需要的试剂和正规操作方法
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这个帖子发布于5年零4天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
如题，目的是测小鼠大便隐血。
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有一种简便的方法，就是用乙肝两对半酶免法的AB显色剂，取便标本后加一滴A液再加一滴B液，5分钟内观察结果，蓝色为阳性，不变色为阴性。我们应用多年效果非常好。检验科免疫室有很多剩余的AB显色剂，检测原理与联苯胺相同，因为乙肝两对半的显色剂底物是四甲基联苯胺，且无致癌性，效果很好！
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粪便+10g/L联苯胺（冰醋酸溶解）2~3滴+3%双氧水2~3滴后观察结果.
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不建议使用联苯胺，因为其强致癌性，且可经皮肤、呼吸道等多途径吸收。建议使用氨基比林、匹拉米洞等无毒试剂替代。灵敏度与联苯胺接近。
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关于丁香园ELISA的概念/原理及操作步骤/注意事项(原理,抗体,包被,抗原,底物) - 免疫实验 - 生物秀
标题: ELISA的概念/原理及操作步骤/注意事项(原理,抗体,包被,抗原,底物)
摘要: [ELISA的概念 原理及操作步骤 注意事项(原理,抗体,包被,抗原,底物)] 相关专题
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术 之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 [关键词:抗体 原理 抗原 包被 底物 缓冲液 孵育 载体]……
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay
)的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术 之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原 、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
二、操作步骤
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1、 包被：用0.05M
PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10&g/ml.在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2、 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml.37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml.
6、 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10&g/ml，每孔加0、1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤，最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6.
(1) 包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸馏水至1000ml
(2) 洗涤缓冲液(PH7.4 PBS )：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0、2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3) 稀释液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。
(4) 终止液(2M H2SO4)：
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml.
(5) 底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml
0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6) TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml
底物缓冲液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32&l
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物缓冲液(PH5.5) 1ml
3%H2O2 2&l
(8) 抗原、抗体和酶标记抗体。
(9) 正常人血清和阳性对照血清。
(1) 聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50&l及100&l加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
(2) 小烧杯、玻璃棒、、吸管和量筒等。
(3) 4℃冰箱，37℃孵育箱。
四、注意事项
1、 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2、 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
包被(或抗原)的选择：将(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10&g/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10&g/ml.
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
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