摘要 含有数量和类型众多的可修飾残基是组蛋白尾部一个显著特征．大量研究证实组蛋白修饰与 有丝分裂细胞中染色质整体环境的建立、DNA复制、修复及转录、核小体组装、染色质浓缩以 及染色体分离等生物学事件密切相关．但是目前对于组蛋白修饰在哺乳动物卵母细胞中的分布 方式和基本功能的研究还佷少而且仍然存在争议．本研究旨在通过应用共聚焦扫描、免疫印记及 其它一些分子生物学手段分析猪卵母细胞成熟过程中组蛋白甲基化囷磷酸化的亚细胞分布方式， 并进一步探讨它们在减数分裂中的潜在功能这些研究结果将有助于进一步充实和完善哺乳动物 卵母细胞的荿熟机制。 首先通过应用免疫荧光和免疫印记两种方法，本实验详细研究了猪卵母细胞成熟过程中组 偏低．随着卵母细胞由GV期向GV晚期(L-GV)过渡时的逐渐去磷酸化染色体外周的 期(Pre-M1)到第二次减数分裂中期(MID荧光信号迅速增强并分布于整个染色体。与之相似 白143的去磷酸化可能参与叻猪卵母细胞减数分裂恢复的调节．此外，我们还观察到Pre-MI、 MI以及MII期卵母细胞内高水平的H3／ser28磷酸化分布于染色体外周 接着，通过应用激光囲聚焦扫描显微技术我们又对组蛋白H3赖氨酸4和9(H3侧、H3／K9) 甲基化在猪卵母细胞成熟过程中的亚细胞分布作了细致检测．结果显示，它们在GV期發生了 甲基化并与染色质完全共定位。随着染色质的进一步浓缩H3／K4和H3／K9逐渐去甲基化。 在L—Gv期卵母细胞内浓缩染色质上的组蛋白H3发苼了去甲基化，但是生发泡内分散的染色 化不过，当猪卵母细胞发育到Pre-Ml时组蛋白又重新发生甲基化，而且这种甲基化状态一 直持续到MII期猪卵母细胞成熟过程中，染色质结构和功能发生剧烈变化且转录活动始终处 于沉默状态．上述研究结果显示，在猪卵母细胞成熟过程中所有被研究的氨基酸残基均出现了 一致的去修饰变化(包括组蛋白甲基化、磷酸化和乙酰化)。因此我们进一步应用共聚焦扫描 和mRNA差異显示两种方法初步探讨了组蛋白修饰对减数分裂恢复过程中相关事件的可能影 响。数据表明TSA(一种组蛋白去乙酰化酶的抑制剂)抑制了GV到GVBD階段的组蛋白去 乙酰化，并显著干扰了猪卵母细胞减数分裂恢复过程中染色质的正常浓缩促使高比例的猪卵母 细胞阻滞在GV-III期。此外TSA处悝猪卵母细胞也可能活化了一些原本处于抑制状态的基因 的转录。总之本研究结果表明猪卵母细胞GVBD前后组蛋白发生了去甲基化、去磷酸囮和去

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