麦仪网-高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法及注意事项 热门搜索： >> & &高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法及注意事项 高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法及注意事项 查看次数 :349899 灭菌锅在使用过程中有哪些使用要点 1、加水：先将排水阀关闭，调整总阀至&全排&。然后，开启进水阀，放蒸馏水至蒸汽发生器内，待水进至距水表顶端大约&1～2cm&处时，关闭进水阀，并将总阀调至&关闭&。 2、灭菌锅装锅：将待灭菌物品装入锅内，注意不要塞得过紧过满，盛有培养基的三角瓶和试管应立放或适度倾斜．以免灭菌过程中培养基污染棉塞。 3、关门：按顺时针方向转动紧锁手柄至红箭头处，使撑挡进入门圈内。然后旋动八角转盘，使门和垫圈密合，以灭菌时不漏气为度，不宜太紧，以免损坏垫圈。 4、通电加温：待电源控制开关的旋钮旋至&开&处，电源指示灯亮，表示已通电，然后再按灭菌物品所需灭菌汽压将旋切旋至&0.07MPa、&0.1mPa&或&0.14MPs&处。此时电热指示灯亮，表示已通电加热。 5、灭菌锅保温保压：当蒸汽套层内的蒸汽随加热达到自动控制压力时，电热指示灯会白动熄灭，表示停止加热。随着热力散发压力降低，电热指示灯再亮，表示继续加热，这表明压力控制器工作正常。当套层内的蒸汽加热到所选择的控制压力时，即可将套层内的蒸汽导入消毒室进行灭菌。此时应先将汽液分离器前的冷凝阀开放少许，然后将总阀调至&消毒&，套层内的蒸汽即通过总阀进入消毒室进行消毒，冷凝水则通过汽液分离器自动排出。这时蒸汽套层内蒸汽压力迅速下降，而消毒室内的蒸汽压力逐渐上升，消毒室内的温度表也随着物品被蒸汽加热而上升。当表的温度升到所需消毒温度&（&一般为&121&℃&）&时，开始计算灭菌时间，维持温度至灭菌完毕。 6、出锅：灭菌完毕后，立即切断电源，按灭菌物品性质和要求，决定消毒室内的蒸汽是自然冷却还是采取&慢排&或&快排&，例如，器械、器皿、固体曲料、土壤、草炭等不致因压力骤然下降而受影响的物品，可直接将总阀调至&慢排&和&快排&，使消毒室内蒸汽迅速排出。当消毒室内压力下降至&0&&时，方可缓慢转动锅门转盘并拨动紧锁手柄将门开启&5～10&cm&。&20～30min&后将灭菌物品取出，此时灭菌物品即较干燥。溶液及培养基等物品灭菌完毕时，只能将总阀调至&慢排&，使消毒室内蒸汽慢慢排出，以免突然降低压力导致培养基剧烈沸腾。也可在灭菌完毕后，关闭总阀，让灭菌物品自然冷却。消毒宝压力表降至&0&&时、再将总阀调至&慢排&数分钟取出灭菌物品。 7、连续操作：如灭菌物品较多需连续操作时，应先检查水位。有足够水量时，可连续使用。如需加水、应把总阀调至&全排&，打开进水阀加水后继续操作。 8、灭菌锅保养：每次灭菌完毕后，关闭电源，停止加热，随后将总阀调至&全排&，排出套层内的蒸汽。开启铂门少许，散发剩余蒸汽，使消毒室内壁经常保持干燥，同时排除蒸汽发生器内的余水。 申安灭菌锅性能特点：*&脚踏式带锁顶开盖，安全方便&*&冷却风扇减少时间，缩短消毒工程&*&五种消毒模式（低压液体灭菌、标准高压灭菌、灭菌-保温模式、加热-保温模式、记忆模式）&*&具备消毒过程中的自动压力微调功能&*&消毒完成后自动排气，6档速度可选&*&外部温度传感器直接检测样品，并可输出数据操作程序：1.&插上电源，打开电源开关。2.&确认&低水位&显示灯为熄灭状态，否则应补水（加水请用自来水）至合适位置，一般以没过隔板为宜。3.&打开灭菌器盖（脚踏盖锁解除踏板，向下按灭菌盖的把手轻轻上提）&放入待灭菌物&按下&灭菌&键，选定灭菌运行&按&温度&、&时间&（一般为121℃，20min）、&排气量&、&冷却风扇&键&设定各相应参数。4.&确认&盖&显示灯、&回收瓶&显示灯（回收瓶的水位应在最低水位和最高水位之间）、&低水位&显示灯为熄灭状态，否则不能运行。应盖好灭菌器盖，安装好回收瓶。然后按下&START&键运行。5.&保温时间设定：运行中灭灯时（盖盖后未按&START&键前），持续按功能键，2秒后，&温度&显示部位闪亮为[F01]，按&START&键，&时间&显示部位闪亮，按时间设定键，显示所希望的保温时间，按&START&键，确定保温时间。6.&运行结束后，按&STOP&键。灭菌室内温度达到灭菌器盖安全连锁装置解除温度时，&结束&显示灯闪亮，仅当压力表指示为&0MPa&时，方可打开灭菌器盖。7.&打开灭菌器盖&取出物品&关闭灭菌器盖&切断电源。& 申安灭菌锅使用注意事项： 一般都是设置115&C，30min灭菌，如果没有葡萄糖的话可以121&C灭菌&低水位无法灭菌，一定要高水位，而且水要充足，一定要加纯净水，不然锅会坏的&装好需要灭菌的东西，加好水，盖上盖子，检查下密封圈，然后设定温度时间，关好阀门开始灭菌&到100&C的时候，需要打开阀门放掉水蒸汽。注意，这里的阀门是专门的放水蒸气的阀门，不是安全阀，更不是锅盖。&放到国内压力降为0的时候，关上阀门。后面的就不用管了，直到灭菌结束&灭菌结束后，关掉开关，等压力降为0就可以开锅拿出所灭的东西了 申安简介： 上海申安医疗器械厂具有二十多年生产历史，产品涉及医疗器械，科学仪器领域，地处上海国际汽车城，有着人才，研发得天独厚的生产环境优势。近年来不断引进国外先进技术，充分发挥自身雄厚的技术力量，研制开发新品种，改造老产品，本厂取得了国家颁发的压力容器生产许可证，并通过了ISO900－2000国际质量管理体系认证，使《申安》牌产品不断升级达到了一个全新的品牌平台。本厂生产的不锈钢压力蒸汽灭菌器和不锈钢蒸镏水器二大系列产品是目前国内同行业中技术含量领先，品种最多，规格最齐的专业生产厂家，产品遍布国内所有省市并远销国外数十个国家与地区，具有坚实的销售和服务网络，在客户中树立了良好的形象，获得了广大用户的青睐。 申安产品以可靠的质量，优越的性能，完美的售后服务，竭诚为广大用户提供方便，热诚欢迎中外客商光临惠顾。 麦仪网简介| Instroduction&of&MY&Instrument 麦仪网，麦仪科学旗下全力打造的国内首家一站式实验室仪器销售平台。麦仪科学前身创立于1992年&，20多年来在实验室仪器业界创立了良好的专业技术和服务品牌，作为中国领先的综合性科学服务提供商，凭借自身强大的技术后盾、经济实力、客户基础、销售网络和品牌忠诚度，被数百家国内外知名科学仪器厂商授权为其产品在中国的一级代理。麦仪网自创立以来，始终以成为客户的实验室管家为宗旨，秉承&诚信、专业、快速、创新&的服务理念，先后服务于包括政府专业实验室、大专院校、药检、商检、质检、工业企业研发、计量中心以及市政工程等广泛领域。 2012年，公司通过整合行业优质丰富的产品资源，先进的物流配送系统，线上线下相结合的服务模式，隆重推出了麦仪网这一科学服务电商平台，旨在通过齐全的产品线和系统化服务为广大科研工作者提供整体解决方案，全面降低时间精力成本，提高工作效率，创造卓越成就！ 麦仪网提供的服务包括但不限于下列模式： l&新建项目的计量、质检、理化测试，实验室整体设计、设备选型、采购配套服务； l&专业实验室、特殊实验室的咨询设计，设备配套，操作规程编撰和培训服务； l&现有实验室仪器设备的定期维护和保养，标准品和耗材的采购服务； l&本公司一级代理产品的市场开发，分销渠道的建立和维护，技术咨询和售后服务； l&新型实验室基础设备、专业仪器的市场调查，市场开发，展览和销售； 使命&Mission 让选购实验仪器变得简单、高效！ 愿景&Vision 成为仪器行业最值得信赖的企业 价值观&Value 诚信&&专业&&快速&&创新&& 即刻关注麦仪网& 分享到： 0 客服热线：400-991-3288 公司总机：021- & && && && && && && && && & 关闭播放器 & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & 麦仪网法律顾问：锦天成律师事务所 黄璞虑 律师 麦仪网 由 麦仪科学仪器（上海）有限公司 | 上海杰晟科学仪器有限公司 联合推出 @ 麦仪科学仪器（上海）有限公司版权所有 沪ICP备号 &&人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养（共120张PPT）&&人教版 下载地址:: 资料下载说明:: 1、本网站完全免费，后即可以下载。每天登陆还送下载点数哦^_^ 2、资料一般为压缩文件，请下载后解压使用。建议使用IE浏览器或者搜狗浏览器浏览本站，不建议使用傲游浏览器。 3、有任何下载问题，请。视频及打包资料为收费会员专用（20元包年，超值！），网站大概需要6万/年维护费。 文件简介:: 微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养巴斯德（近代微生物学家和奠基人）㈠.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物（如：草履虫、变形虫等）病毒、类病毒、朊病毒◆微生物的共同特点：一.微生物基础知识几种菌落及其形态酵母菌青霉菌――青霉素真菌病毒的结构:由核酸和蛋白质构成SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白质）吸附注入合成释放组装病毒的繁殖病毒的营养方式：寄生1.何为培养基？3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？有何作用？请举例说明。思考:2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？一、培养基一、培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。1.定义:2.分类:一、培养基按成分划分合成培养基天然培养基半合成培养基按形态划分固体培养基液体培养基半固体培养基按功能划分选择培养基鉴别培养基(1)按培养基的成分a.合成培养基:由成分完全已知的化学试剂（各成分包括微量元素的量都确切知道）配制而成特点:成分已知、精确、重复性高、但价格较贵、配制麻烦、且微生物在其中生长速度较慢。如:察氏（Czapek）培养基等。一、培养基b.天然培养基:由天然物质配制而成,成分难以确定,但配制方便,营养丰富。蒸熟的马铃薯----用于培育霉菌普通牛肉汤----用于培育细菌一、培养基c.半合成培养基:一类主要用已知化学成分的试剂配制，同时又添加某种或某些天然成分的培养基如:马铃薯蔗糖培养基一、培养基(2)按照培养基形态划分a.固体培养基在液体培养基中加入2%左右的凝固剂(如:琼脂、明胶等）的固体状态的培养基。用途:常用于微生物的分离、鉴定计数和菌种保存。b.液体培养基不加入凝固剂,成分均匀,微生物可充分接触和利用培养基中的养料,适于生理研究、发酵工业等。一、培养基c.半固体培养基在液体培养基中加入少量(0.2―0.5%)凝固剂而呈半固体状态。(2)按照培养基形态划分用途:可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面固体培养基半固体培养基液体培养基主要用于微生物的分离、计数等主要用于观察微生物的运动、鉴定菌种等主要用于工业生产需加入凝固剂，如琼脂(3)按照培养基的功能划分a.选择培养基b.鉴别培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长的培养基。根据微生物的代谢特点,在培养基加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的微生物。培养基，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质.另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质的需求,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气等的要求。一、培养基凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源CO2NaHCO3等有机碳源糖类脂肪酸花生饼石油等①构成细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的能源1、微生物的碳源自养型和异养型微生物分别能利用哪类碳源物质？思考无机氮源N2、NH4+、NO3-、NH3等有机氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物2、微生物的氮源哪些微生物能够利用分子态氮？氮源能否为微生物提供能量？思考概念成分作用为什么不可缺少？常见的生长因子微生物生长不可缺少的微量有机物有机物酶和核酸的组成成分缺乏合成这些物质所需酶或合成能力有限维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3、生长因子培养基的配制原则①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml。一、培养基根据配方你能配制出100ml培养基吗？配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？1、何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2、消毒和灭菌的区别？3、常用的消毒方法有哪些？4、常用的灭菌方法有哪些？5、干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。二、无菌技术自主学习：对实验操作的空间操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。无菌操作内容消毒使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。二、无菌技术（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（例如牛奶）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。消毒的方法常用的消毒方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒……二、无菌技术1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min。常用的灭菌方法二、无菌技术实验原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气,从而使温度高于100℃。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。干热灭菌实验原理紫外线灭菌是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。实验原理实验室常用灭菌方法的比较A.培养细菌用的培养基或培养皿B.玻棒、试管、烧瓶和吸管C.接种环、接种针D.实验操作者的双手灭菌灭菌灭菌消毒二、无菌技术消毒与灭菌的区别实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1、计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100mL的培养基时，各种成分的用量。2、称量：准确地称取各种成分。牛肉膏比较粘稠，可以用玻绑挑取，放在称量纸上称量。牛肉高和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。3.溶化将称好的牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加入少量的水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。往烧杯中加入称量好的蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解。加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中，不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。当琼脂完全熔化后，补加自来水100mL。4、灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃条件下，灭菌15―30min。将培养皿用几层旧报纸抱紧，5―8套培养基作一包，包好后放入干热灭菌箱内，在160―170℃下灭菌2h。6．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24―48小时，以检查灭菌是否彻底。5、倒平板待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板操作1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234倒平板技术12343.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。倒平板技术倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。二实验操作二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化灭菌倒平板二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中，减少误差。计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板②加琼脂的目的是什么?计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板②加琼脂的目的是什么?作为凝固剂计算常用的凝固剂――琼脂主要成分是硫酸半乳聚糖熔点为96℃凝固点为40℃透明度强。二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板③在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板③在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？计算二实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基称量溶化灭菌倒平板④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？不能，因为培养皿要保持干燥，应该用干热灭菌。计算三、基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存（一）接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。接种工具和方法接种和分离工具1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀㈡.纯化大肠杆菌平板划线法和稀释涂布平板法。微生物的接种的常用接种方法有：1.平板划线的操作方法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.平板划线法一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。问题探讨1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法 1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.涂布平板操作涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。问题探讨吸取充分均匀后的菌液取含有9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。将试管于震荡机上，使菌液混合均匀取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL，加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。重复此步骤直至所需要的稀释浓度。由最后稀释菌液中以玻璃吸管取出0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。⑷遣ＡО艚毒凭⑷遣ＡО粼诨鹧嫔先忌须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。3、微生物的恒温培养3、微生物的恒温培养单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体四、课题成果评价1、未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？（对照组）没有。若有菌落，说明灭菌不彻底。2、在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立的菌落？这些菌落的颜色、形状和大小相似吗？是。相似。如在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。四、课题成果评价3、培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因。菌落的大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大。4、如果你在培养基上观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？说明有杂菌污染。可能原因：灭菌不彻底、接种过程或培养过程中有杂菌污染。四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2、长期保存：甘油管藏法4、菌种的保存1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是()A光合细菌B根瘤菌C硝化细菌D乳酸菌2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是()A糖、有机酸等B二氧化碳、碳酸盐C蛋白质D无机氮化物ACAC练习3、下列叙述不正确的是()A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同C微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌BC练习4.获得纯净培养物的关键是（）A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B接种纯种细菌C适宜环境条件下培养D防止外来杂菌的入侵D练习5.下列操作与无菌技术无关的是()A接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B接种前用火焰烧灼接种针C培养在50℃左右时搁置斜面D在酒精灯的火焰旁完成C练习练习6.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能够杀死什么为标准()A球菌B杆菌C螺旋菌D芽孢D7.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板C8.下列有关平板划线接种法的操作错误的是（）A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连D9. 产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( )A．一个细菌，液体培养基B．许多细菌，液体培养基C．一个细菌，固体培养基D．许多细菌，固体培养基C解析：菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上肉眼可见，是作为菌种鉴定的重要依据，若是多种细菌形成的菌落则不是标准菌落。答案：C评析：本题考查菌落的形成和特点，以及在计数中的应用。10.消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理( )①皮肤 ②饮用水 ③牛奶 ④注射器 ⑤培养皿 ⑥接种环 ⑦培养基 ⑧果汁 ⑨酱油 ⑩手术刀A．①②③⑧⑨ B．④⑤⑥⑦⑩C．①②③④⑤⑥⑧D．以上全部c解析：消毒指用比较温和的方法杀死微生物的营养细胞，适用于那些不耐高温的液体。如牛奶、果汁、酱油，这样可以使其中的营养成分不被破坏。另外对要求不是很严格的皮肤、饮用水也用消毒的方法处理。而对于严格要求的接种环、手术刀等必须进行灭菌处理。答案：A11.有关微生物营养物质的叙述中，正确的()A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量典例解析D练习12.某学校打算开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理,准备食用菌栽培所需的各种原料和用具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题:练习①对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养