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【求助】PVDF膜，DAB显色后，还可以再检测别的抗原吗
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这个帖子发布于8年零223天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
谢谢，我的二抗是抗小鼠的。
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我就做过NC膜的知道可以反复利用不过PVDF膜道理应该也是一样的一张NC膜可使用多次，对多种蛋白进行杂交1．如前次杂交结果条带距离本次杂交的蛋白的预计位置差别较大则只需用PBST洗涤掉发光液（10min×3次）后从一抗杂交开始，后续步骤同前。2．如前次杂交结果条带距离本次杂交的蛋白的预计位置较近则需更强的洗涤，可用 strip液（可用杂交袋）于室温摇动洗涤30min~60min，然后用PBST洗涤10min×3次，再从封闭开始，后续步骤同前。3．对于杂交若干次的膜，如果常规洗涤方法不易去掉众多条带，可用强度更强的自配的strip液（可用杂交袋）于50℃洗涤30min，然后用PBST洗涤10min×3次，再从封闭开始，后续步骤同前。
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DAB可能不行，ECL没问题。
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DAB显色后，不行！
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为何说DAB不行呢，难道是底物对蛋白有损伤或对抗体有损伤？没听说。如果是因为DAB显色后条带存在的部位已经显色，不能进行分子量相差不多的蛋白的显色倒是可以解释的。ECL在短时间内因为酶活尚在也不可以的。但ECL过段时间酶活降低就可以了，主要新标记抗体荧光掩盖了旧的。如果是分子量相差较大就无所谓了，因为要的是目的蛋白的条带。用洗脱液也可以解除抗体结合但不知对DAB的显色能否解除。我是没做过DAB的重复标记，但如果DAB法用来检测分子量不是靠在一起的蛋白，并且原来的蛋白检测也没有什么背景的话，我个人认为是可以的。
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听说DAB染色后之所以不能是因为,它的显色反应产生了不溶性的沉淀,将此处的条带包裹了起来,而这种沉淀跟PVDF膜的结合力又很强,所以就不能再检测别的了
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