感受态细胞有质粒吗_作业帮
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感受态细胞有质粒吗
感受态细胞有质粒吗
所谓的感受态,就是指易于吸收外源DNA的状态,感受态细胞是指经过处理（一般用CaCl溶液处理即可)后处于能够吸收外源DNA的状态的细胞.在基因工程中,当受体细胞是植物时,可以选用农杆菌转化法,花粉管通道法和基因枪法；而受体细胞是动物细胞时,一般选用显微注射法；当受体细胞是微生物时,才用感受态的方法.所以,质粒也可以成为感受态细胞.
感受态有无质粒这两者可以说是无关的，人们为了向细胞导入目的基因就有特定的溶液处理该细胞，使细胞处于感受态，就是容易让质粒进入的一种状态而已。而是否有质粒则是该细胞自己与生俱来的又或者是人们导入的，因此二者并无一定的直接关系...
没有，受体菌是你自己选择的，肯定是没有质粒的。
有～ 不过拷贝数很低
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【求助】一次最多可转多少ng的质粒进入100ul的感受态细菌？
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这个帖子发布于8年零246天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问大家：一次最多可转多少ng的质粒进入100ul的感受态细菌？曾看到有人说转５０ng就够了．太多了也转不进去吗，不超过多少呢
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我觉得转化质粒的量存在多个可能性：　　一：转化质粒或空载体．转化已有的重组质粒时，质粒的量需要１００ng足以．　　二：转化连接产物时，由于连接酶的连接效率很低（例外：由于平末端连接容易，受低效率连接酶的影响较小），连接体系当中成功连入目的片段的重组质粒很少，所以建议将连接体系全部用于转化．　　其实不管转化的是质粒或连接产物，量的要求都差不多．　　另外，感受态细胞的转化效率如何也很关键．如果能达到１０的８次方，就很理想了．　　可见转化的质粒用量是一个综合考虑的因素，建议根据自己实际情况而定：质粒量，感受态细胞浓度，转化效率．
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Takara使用说明书上说：加入60ul感受态细胞，加入的DNA最好在10ng一下
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谢谢两位！
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zhaoziyi 我觉得转化质粒的量存在多个可能性：　　一：转化质粒或空载体．转化已有的重组质粒时，质粒的量需要１００ng足以．　　二：转化连接产物时，由于连接酶的连接效率很低（例外：由于平末端连接容易，受低效率连接酶的影响较小），连接体系当中成功连入目的片段的重组质粒很少，所以建议将连接体系全部用于转化．　　其实不管转化的是质粒或连接产物，量的要求都差不多．　　另外，感受态细胞的转化效率如何也很关键．如果能达到１０的８次方，就很理想了．　　可见转化的质粒用量是一个综合考虑的因素，建议根据自己实际情况而定：质粒量，感受态细胞浓度，转化效率．学习了，谢谢
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感受态细胞的制备与质粒DNA的转化
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【求助/交流】“将感受态细胞和DNA混合物冰浴30min”的作用是什么？
求教各位前辈：
大肠杆菌化学转化法，其中有一个步骤：“将感受态细胞和DNA混合物冰浴30min”，请问各位，这个过程的作用是什么？
目的是“使细胞和DNA充分混合吗”？
如果是，请问只有实现了这个充分混合就可以吗，而不考虑时间的长度？比如1 s 就实现了充分混合，还需要再孵育吗？
注释：微流控芯片技术可以实现两种液体的瞬间混合，比如0.1 s 。
补充：根据虫友“woshishao” 给我的三个假说，其在说明一个问题，就是这个30min的孵育过程是为了让DNA和细胞上的LPS结合，这样，在随后的热激促使细胞吞下DNA-LPS复合物（this incubation was equivalent to the time of DNA adsorption to the competent cells）。
但是这不是我想要的答案，我的问题是：DNA结合到细胞上为什么需要这么久？其原因是不是因为DNA扩散到细胞表面需要这么久？
因为我们知道，如果DNA和细胞足够近的话，其结合（相当于化学反应）是相对快的，可以说是瞬间完成。当然对于这一点，也是我的猜测，根据是免疫分析也是大分子反应，孵育过程长（2h），这个过程就是一个扩散过程；而当在微流控芯片上完成这个过程时，就需要5s，因为微流控芯片上的快速混合。
因此我据此猜想，DNA与细胞的这个30min的孵育过程也是为两者的扩散接触；如果能够在0.1s内实现这个过程的话，其形成DNA-LPS复合物的过程就可以在0.1s内完成。
请各位学者专家拍砖！
呵呵，虽然其机理到现在还不清楚，但是肯定不是你想象的那样的。有可能的原因是使菌体在此期间内恢复一定的代谢活力，但是代谢活力又不能太高。同时还要让菌体保持在较低温度，让其细胞壁不像刚拿出来那么脆又不至于太皮实，以为下一步热激做准备。 给你几个假说：
1.半个小时冰浴，是为了让加入的质粒与细胞表面的脂多糖发生结合，从而粘附在细胞表面。从而在热激后进入细胞。
参考文献：
Mechanism of artificial transformation of E. coli with plasmid DNA: Clues from the influence of ethanol
SARKAR S CHAUDHURI S BASU Tarakdas
2.Ca能与加入的DNA分子结合，形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物，黏附在胞膜的外表面
来源：网络，具体忘记了
3.One proposed hypothesis is that DNA crosses through the least-barrier path at zones of adhesion, where the outer and inner cell membranes fuse to pores in the cell wall. The zones of adhesion are rich in negatively-charged lipo polysaccharide (LPS) molecules and DNA also being negatively charged, cannot enter the cell easily as the two negative polarities repel each other. A divalent cation such as calcium, is believed to form stable coordination complexes with phosphates, and thus may facilitate the association of the two phosphate-rich structures like DNA and LPS.
参考文献：
DNA Science: A First Course in Recombinant DNA Technology, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1990, pp. 26–29.
最后一种假说，我偷懒，楼主自己翻译下吧。:D Originally posted by woshishao at
给你几个假说：
1.半个小时冰浴，是为了让加入的质粒与细胞表面的脂多糖发生结合，从而粘附在细胞表面。从而在热激后进入细胞。
参考文献：
Mechanism of artificial transformation of E. coli with plasmid&&... :tiger37: 受教了 将dna吸附于细胞表面，便于转化 应该是使DNA充分附着于细胞表面，在42度热激时就可以进入细胞。 Originally posted by woshishao at
给你几个假说：
1.半个小时冰浴，是为了让加入的质粒与细胞表面的脂多糖发生结合，从而粘附在细胞表面。从而在热激后进入细胞。
参考文献：
Mechanism of artificial transformation of E. coli with plasmid&&... 以上假说在说明一个问题，就是这个30min的孵育过程是为了让DNA和细胞上的LPS结合，这样，在随后的热激促使细胞吞下DNA-LPS复合物（this incubation was equivalent to the time of DNA adsorption to the competent cells）。
但是这不是我想要的答案，我的问题是：DNA结合到细胞上为什么需要这么久？其原因是不是因为DNA扩散到细胞表面需要这么久？
因为我们知道，如果DNA和细胞足够近的话，其结合（相当于化学反应）是相对快的，可以说是瞬间完成。当然对于这一点，也是我的猜测，根据是免疫分析也是大分子反应，孵育过程长（2h），这个过程就是一个扩散过程；而当在微流控芯片上完成这个过程时，就需要5s，因为微流控芯片上的快速混合。
因此我据此猜想，DNA与细胞的这个30min的孵育过程也是为两者的扩散接触；如果能够在0.1s内实现这个过程的话，其形成DNA-LPS复合物的过程就可以在0.1s内完成。
请各位学者专家拍砖！ 不要追究这个了。你可以试一下一秒后热激的效率啊 Originally posted by xiangxingwei at
不要追究这个了。你可以试一下一秒后热激的效率啊 你说到点子上了，这不是先有理论依据或假说，才进行试验的吗？毕竟，实验不是一件很好玩的事情~ 上面说的理论依据是目前比较权威的 实际上，冰浴5分钟足够了，我一般只冰浴5分钟。具体机理不清楚。}