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各位前辈，请问如何利用PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡？
回答者：匿名用户
&PI染色法（活细胞染色）检测细胞凋亡
【染料及试剂】
（1）&&&&&&&& 含0.1%TritonX-100的PBS缓冲液（pH7.4）
（2）&&&&&&&&
PI染液:将PI（碘化丙啶）溶于含0.1%TritionX-100的PBS中，终浓度为50&g/ml，含RNase 100&g/ml，避光保存。
（3）&&&&&&&& 荧光显微镜
【操作方法】
制备凋亡细胞悬液，浓度为106/ml；
取1ml的细胞悬液，加10&l的PI染液混合，作用10min；
加入5ml PBS，1500r/min离心5min，弃上清，重复洗涤2次；
重悬细胞，滴片并用盖玻片封片；
【结果判断】
在荧光显微镜下选用大于536nm的激发光观察：正常活细胞胞核被PI着染呈红色；早期凋亡细胞胞核浓缩，染色加深，或核染色质聚集于核膜一边，呈新月 状；晚期凋亡细胞胞核碎裂成大小不等的原形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。&
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＞＞＞水溶性染色剂PI，能与核酸结合而使细胞核着色，可将其应用于细胞..
水溶性染色剂PI，能与核酸结合而使细胞核着色，可将其应用于细胞死活的鉴别。细胞浸泡于一定浓度的PI中，仅有死亡细胞的细胞核会被染色，活细胞则不着色。但将PI注射到活细胞后，该细胞核会着色。利用PI鉴别细胞的基本原理是
A．死细胞与活细胞的核酸结构不同 B．死细胞与活细胞的核酸含量不同C．活细胞能分解染色剂PID．活细胞的细胞膜阻止PI的进入
题型：单选题难度：中档来源：0103
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据魔方格专家权威分析，试题“水溶性染色剂PI，能与核酸结合而使细胞核着色，可将其应用于细胞..”主要考查你对&&生物膜的选择透过性&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
生物膜的选择透过性
生物膜的功能特点生物膜的功能特点1、特点：细胞膜和其他生物膜都是选择透过性膜。 2、具体表现：水分子可自由通过，一些离子和小分子也可以通过，而其他的离子、小分子和大分子则不能通过。 半透膜实验：1、原理：生物膜的选择透过性，渗透作用。2、渗透现象发生的条件：半透膜、细胞内外浓度差。渗透作用（osmosis）两种不同浓度的溶液隔以半透膜（允许溶剂分子通过，不允许溶质分子通过的膜），水分子或其它溶剂分子从低浓度的溶液通过半透膜进入高浓度溶液中的现象。或水分子从水势高的一方通过半透膜向水势低的一方移动的现象。知识拓展 1、细胞膜和其他生物膜都是选择透过性膜，它具有的特点是： ①水分子可以自由通过。 ②细胞需要的离子和小分子也可以通过。 ③其他的离子、小分子和大分子则不能通过。2、物质通过生物膜的跨膜运输，并非都是顺相对含量梯度的。 3、具选择透过性是生物膜的功能特性，此特性与细胞的生命活动密切相关，是“活细胞”的一个重要特征——丧失选择透过性意味着生命活性的丧失。 4、5、细胞膜具有选择透过性的结构基础是细胞膜上载体蛋白的种类和数量不同。 例&& 下列能够反映细胞膜具有选择透过性功能特点的实例是(&& ) ①白细胞吞噬病菌②细胞膜外K+的浓度远低于膜内③变形虫的变形运动④唾液腺细胞分泌唾液淀粉酶⑤海带细胞内的I—浓度远远高于海水中的 I一浓度 A．①③④& B．②④⑤& &C．①③& D．②⑤ 思路点拨：细胞膜具有选择透过性功能是通过对物质的选择性吸收来体现的，其主要表现为载体蛋白所具有的特异性。题干中②⑤所述物质都是通过主动运输方式进入细胞的，是细胞膜具有选择透过性功能的具体体现。①③是细胞膜结构特点的具体体现，唾液腺细胞分泌唾液淀粉酶是通过胞吐实现的，其理论依据也是细胞膜的结构特点。 答案D
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735868275787353858368686479037PI染色以后可以保存多久(细胞周期)
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[PI染色以后可以保存多久(细胞周期)] 本来染色之后准备上流式检测细胞周期，结果机器突然坏了，把样品放在4度冰箱里，一周之后机器修好了，不知我的样品还可以用来检测吗？ 关键词:[细胞周期]…
本来染色之后准备上流式检测细胞周期，结果机器突然坏了，把样品放在4度冰箱里，一周之后机器修好了，不知我的样品还可以用来检测吗？
回复本来染色之后准备上流式检测细胞周期，结果机器突然坏了，把样品放在4度冰箱里，一周之后机器修好了，不知我的样品还可以用来检测吗？请教一下，PI染的是固定过的细胞，还是没固定的细胞啊回复固定以后的回复固定以后的我做碘化丙锭荧光染色，细胞不固定，用来染死细胞。和你的还有点不一样。荧光素碘化丙锭(PI)不能进入具有完整细胞膜的活细胞，只能进入有缺损的膜或固定的死亡细胞，与相结合，在在488 nm的绿色光激发下，在波长660 nm左右检测到红色荧光。这样就可以将死活细胞区分开来，计算出细胞存活率。回复建议不要做了,一周以后即使是固定过的细胞,CV值也会增大,数据不准确.就细胞周期固定,我专门做过验证,固定时间越长,CV值会越大,图形也就会越难看.一周的时间太长了,重复做吧.即使有些老师告诉你可以固定一周,或者文献上有写的,只是自欺欺人罢了.回复应该在15分钟之内上机吧回复啊，不对，是加入15分钟后上机，不超过1小时
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PI染色后细胞量减少我做细胞分散后PI染色荧光显微镜观察,细胞分散后细胞的量还可以,但是经过固定,洗,PI染色,再洗之后只有极少的细胞,激发后还没有荧光.请问有经验的高手,PI染色过程需要注意哪些问题?
我做细胞分散后PI染色荧光显微镜观察,细胞分散后细胞的量还可以,但是经过固定,洗,PI染色,再洗之后只有极少的细胞,激发后还没有荧光.请问有经验的高手,PI染色过程需要注意哪些问题?
博凌科为 主要是离心,去液的问题.我以前做的本科毕业设计就是比较三种荧光探针的性能,PI是个标准的对照. 细胞分散后放入离心管,我做的时候是1200r/min,然后倒掉再加PBS洗.这个倒液很重要,一定要一次到干净,而且要快,千万不要因为管底有一点液体而再到一次,这样会损失大量细胞.剩余的一点培养基会在之后再洗两遍的时候洗掉的.有时细胞数量不太多时也是同样的操作,不用怀疑,细胞肯定有. 之后的乙醇固定后细胞死亡,到的时候要缓一点,但同样不要回流后再倒.死细胞间的结合能力弱,太快倒掉会全流出去的. 我当时是在加了PI后洗一遍,一个小时后去做的流式,效果基本都很好的. 楼主,这个实验主要是离心,倒液,动作大胆一些,快一些效果会更好,否则时间太久了影响效果.对了,还有就是若剩的液体太多,就多离一次心,一般损失是可以接受的.PI染色后要在30min内去检荧光,要不会衰减的. 希望我的回答对你有帮助,祝实验顺利!
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