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蛋白表达标签
蛋​白​质​纯​化
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【求助】TEV一酶切蛋白就降解，而且酶切不完全！
【求助】TEV一酶切蛋白就降解，而且酶切不完全！
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这个帖子发布于6年零214天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大虾：
请教个问题：
原核表达 目的蛋白（带有his-tag）一次镍柱后纯度比较高。晚上透析酶切过夜，电泳结果如下： 蛋白酶切不完全；二次镍柱结果也不理想！说明：1： 一次镍柱结果2： 酶切后3： 二次镍柱的流穿4-5：20mM 咪唑洗脱6： 250mM 咪唑洗脱
woniudetiankong edited on
回复：【求助】求：TEV一酶切蛋白就降解，而且酶切不完全！
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偶密切关注！ 热切期待你们的回复！~~~
回复：【求助】TEV一酶切蛋白就降解，而且酶切不完全！
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你的酶切条件是什么啊？我也在用TEV酶呢，酶切也不完全
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TEV蛋白酶酶切体系是什么样的？
TEV蛋白酶酶切体系是什么样的？
TEV蛋白酶对酶切的缓冲液，温度等条件要求相对宽松，一般我们使用就是 50mMTris7.5 ，500mM NaCl，5%Glycerol，4℃过夜。 : Originally posted by dshlove at
TEV蛋白酶对酶切的缓冲液，温度等条件要求相对宽松，一般我们使用就是 50mMTris7.5 ，500mM NaCl，5%Glycerol，4℃过夜。 请问，如果我做100微升的体系，里面最多加多少微升的蛋白 : Originally posted by jiapingshk at
请问，如果我做100微升的体系，里面最多加多少微升的蛋白... 这得看你的酶的活性了，我们一般是1mg的酶去切100mg的蛋白（可能量有点多，自己做的酶，活性可能差点，但是用的不心疼）。:D
仅供参考。 : Originally posted by dshlove at
这得看你的酶的活性了，我们一般是1mg的酶去切100mg的蛋白（可能量有点多，自己做的酶，活性可能差点，但是用的不心疼）。:D
仅供参考。... 如果我的体系一共是100微升，但是往里面加蛋白超过了50微升，会有不良影响吗？谢谢 : Originally posted by jiapingshk at
如果我的体系一共是100微升，但是往里面加蛋白超过了50微升，会有不良影响吗？谢谢... 只要蛋白不沉淀就不要考虑什么其他的影响。 有说明说OD280比值在1:100，但是难切的蛋白，也有使用1:5的，我使用过1:8,1:10,1:20，根据蛋白调整tev用量吧。
var cpro_id = 'u1216994';
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