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【求助】硫酸铵分级沉淀酶
本人现在从发酵液中利用硫酸铵分级沉淀提取酶,打算做一个硫酸铵的分级沉淀曲线,就是向发酵液中分别加入20-90%饱和度的硫酸铵,然后测定上清液和沉淀中的酶活,确定最佳的硫酸铵沉淀浓度.一般文献上也是这么说的,但是在具体试验中发现了很多小问题:
1 在测定上清液的过程中,硫酸铵并没有除去,用比较小的饱和度(0-30%)可能对酶活没有多大影响,但是当饱和度达到50%左右,硫酸铵的浓度已近很大了,个人觉得肯定对酶活有影响的,个人的情况就是如此,当硫酸铵为40%时,上清液中酶活很低了(小于5%),但是离心时酶并没有沉淀下来.不知道大家测时是否也遇到过这种情况
2 测沉淀的酶活时,不知道大家的总酶活是怎么测的,因为当你用适量的缓冲液溶液沉淀后,然后在测量酶活时,当底物浓度一定时,你的酶活在高也没有用,底物就那么多,因此个人觉得应该用相等体积的缓冲液(假如沉淀是从100mL粗酶液中沉淀出来的,缓冲液的体积也应该是100mL)重新溶解沉淀,这样才能保证条件一致,不至于出现酶过量的情况.
以上两点问题一般的文献上都没有提到,不知大家做硫酸铵沉淀曲线的时候是否考虑到?
没有人顶么？
顶一下…… 不懂& &帮顶。。。。 做盐析时要注意温度、硫酸铵要粉末、要慢慢搅匀 1.一般硫酸铵不对酶活有影响,最好是实验看看.离心沉淀少有可能是转速低或酶蛋白很少.
2.沉淀溶解到缓冲液中,直接测定就可以了,仔细看看酶活的定义,在一定范围内有线性关系. 友情帮顶！对这个问题不是很懂啊 沉淀蛋白的方法有好多，不排除硫酸铵不适合，可是再试试别的方法，看看到底是你的样品的问题还是方法的问题，多试试 有时候上清和沉淀都测，有时候只测上清，你至少确定两个点，一个点保证你沉淀的是杂蛋白，就是说上清酶活很高，一个是上清酶活很低的点， 1.你可以用透析袋把硫酸铵除去。当时我就这么做的，因为硫酸铵对我测定时候最后一步显色影响很大。
2.完全可以采用原来缓冲液等体积的来溶解沉淀。
其实你没必要上清和沉淀都测，只测上清就可以了。
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& 实验探究物质的组成成分以及含量知识点 & “（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了...”习题详情
176位同学学习过此题，做题成功率80.6%
（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了测定纯碱样品（含NaCl杂质）中碳酸钠质量分数的实验方案．请回答下列问题：（1）碳酸根离子沉淀法．实验步骤：①用托盘天平称取样品放入烧杯中加水溶解；②加入足量BaCl2溶液充分反应．证明反应后BaCl2剩余的方法是静置，取少量上层清液滴加碳酸钠溶液，有白色沉淀生成，证明氯化钡剩余&；③过滤、洗涤、干燥、称量沉淀的质量为mg；④样品中碳酸钠的质量分数为106m197w×100%&．（2）气体法．学习小组利用如图装置测定样品中碳酸钠的质量分数．①实验装置乙中盛放的试剂为浓硫酸&，装置丁的作用是防止空气中的二氧化碳和水蒸气进入丙中&．②学习小组通过测量丙装置实验前后的质量．确定二氧化碳的质量．实验中滴加稀硫酸的速度过快，产生的气流过急．会导致测得样品中碳酸钠的质量分数偏低&（填写“偏高”“偏低”或“不变”）．（3）测氯化钠法．请你完成下列实验方案：称取一定质量的样品放入烧杯中加水溶解：加入足量稀硝酸，再加入足量的硝酸银溶液&；过滤、洗涤、干燥、称量沉淀的质量；计算出氯化钠的质量，再得样品中碳酸钠的质量分数．
本题难度：一般
题型：填空题&|&来源：2013-潍坊
分析与解答
习题“（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了测定纯碱样品（含NaCl杂质）中碳酸钠质量分数的实验方案．请回答下列问题：（1）碳酸根离子沉淀法．实验步骤：①用托盘天平称取样品放入烧杯中加水溶解；②加入足量BaCl2溶...”的分析与解答如下所示：
钡离子能和碳酸根离子结合生成白色沉淀；根据白色沉淀碳酸钡的质量可以求出碳酸钠的质量，进一步可以求出样品中碳酸钠的质量分数；浓硫酸具有吸水性，碱石灰能够吸收水和二氧化碳；如果气流过急，则二氧化碳不容易完全吸收；硝酸银能和氯化钠反应生成白色沉淀氯化银．
解：（1）②证明反应后BaCl2剩余的方法是：静置，取少量上层清液滴加碳酸钠溶液，有白色沉淀生成，证明氯化钡剩余． 故填：静置，取少量上层清液滴加碳酸钠溶液，有白色沉淀生成，证明氯化钡剩余．④mg沉淀是碳酸钡，设碳酸钠的质量为X，Na2CO3+BaCl2=Ba CO3↓+2Na Cl，& 106&&&&&&&&&& 197&& X&&&&&&&&&&& mg106197=XmgX=106m197g，样品中碳酸钠的质量分数为：106mg197wg×100%=106m197w×100%．故填：106m197w×100%．&（2）①二氧化碳进入氢氧化钠溶液前应该除去水，浓硫酸具有吸水性，可以用浓硫酸除去二氧化碳中的水．故填：浓硫酸．为了防止空气中的二氧化碳和水蒸气影响实验结果，可以用碱石灰进行吸收．故填：防止空气中的二氧化碳和水蒸气进入丙中．②实验中滴加稀硫酸的速度过快，产生的气流过急，二氧化碳不能完全被氢氧化钠溶液吸收，导致测得样品中碳酸钠的质量分数偏低．故填：偏低．（3）稀硝酸和碳酸钠反应能生成硝酸钠、水和二氧化碳，硝酸银和氯化钠反应能生成氯化银沉淀和硝酸钠，加入稀硝酸是为了把碳酸钠除去．故填：加入足量稀硝酸，再加入足量的硝酸银溶液．
根据化学方程式进行计算时，要注意规范性，计算要准确，化学方程式要注意遵循质量守恒定律，即配平．
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（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了测定纯碱样品（含NaCl杂质）中碳酸钠质量分数的实验方案．请回答下列问题：（1）碳酸根离子沉淀法．实验步骤：①用托盘天平称取样品放入烧杯中加水溶解；②加入足量B...
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经过分析，习题“（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了测定纯碱样品（含NaCl杂质）中碳酸钠质量分数的实验方案．请回答下列问题：（1）碳酸根离子沉淀法．实验步骤：①用托盘天平称取样品放入烧杯中加水溶解；②加入足量BaCl2溶...”主要考察你对“实验探究物质的组成成分以及含量”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
实验探究物质的组成成分以及含量
【知识点的认识】该探究是为了研究物质的组成成分以及含量而进行实验探究和计算．具体来说，可分为两块．一块是根据问题情景，结合可能含有的某物质的特性，利用所称取的样品进行实验探究，分析推断出该物质的组成成分，并分析得出用来计算所取样品中某物质质量的气体、沉淀等特殊物质的质量．另一块是根据有关的化学方程式和该物质的组成成分，进行综合计算． 【命题方向】该考点的命题方向主要是以实验探究兼计算题的形式，给出有关的信息提示和相关数据，让学生通过实验探究，分析推断出该物质的组成成分；然后让学生根据有关的化学方程式和该物质的组成成分，进行综合计算．题型主要是实验探究题兼计算题的综合题型．中考的重点是考查学生通过实验的方法和有关化学方程式的计算，来研究物质的组成成分以及含量能力． 【解题方法点拨】解答这类题目时，首先，赏析问题情景，找到实验探究的反应原理，以及计算所要用到的数据；再根据实验的反应原理，利用所称取的样品进行实验探究，分析推断出该物质的组成成分；然后，根据化学方程式计算出该样品中某一成分的质量；然后，将所求的该成分的质量除以所取样品的质量，再乘以100%，得出所要探究的物质中该成分的含量；进而推算出其它成分的含量．
与“（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了测定纯碱样品（含NaCl杂质）中碳酸钠质量分数的实验方案．请回答下列问题：（1）碳酸根离子沉淀法．实验步骤：①用托盘天平称取样品放入烧杯中加水溶解；②加入足量BaCl2溶...”相似的题目：
为探究四瓶未知无色溶液的成分，甲、乙、丙三组同学分别设计了如下实验．已知四种溶液分别是碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙和稀盐酸中的一种．[实验过程]甲组实验方案：将四瓶溶液标号分别为1、2、3、4，只利用紫色石蕊试液进行实验．
实验步骤和操作&实验现象和结论&（1）如图所示：&①2号溶液由无色变为红色，则2号溶液是&&&&②另三支试管中溶液均由无色变蓝色&（2）另取1、3、4、号溶液，分别滴加2号溶液&①3号溶液中有气泡放出，则3号溶液是&&&&②另二支试管中溶液无明显变化&（3）另取1、4号溶液，分别滴加&&&&&①1号溶液中有白色沉淀析出，则反应的化学方程式为&&&&②另一支试管中溶液无明显变化&乙组实验方案：不用其他试剂进行实验．
实验操作&实验现象&实验结论&任取三种溶液于三支试管中，分别滴加第四中溶液&一支试管中有气泡放出，其余二支试管中溶液无明显变化&第四种溶液为稀盐酸&一支试管中有白色沉淀析出，其余二支试管中溶液无明显变化&第四种为碳酸钠溶液&三支试管中溶液均无明显变化&第四种为氢氧化钠溶液&[实验分析]经过交流后，发现实验结论&&&&（填序号）是不正确的；若该结论正确，对应的实验现象应时&&&&．丙组实验方案：将四种溶液编号为1、2、3、4，不用其他试剂进行实验．
实验操作&实验现象&实验结论&（1）如图所示：&①A、B、C均无明显变化②D中有沉淀析出&标号为1、2、3、4的溶液依次为（用化学式表示）：&&&&或&&&&&
（2小左小o昆明）（左）有一包白色粉末，可能是由Na2CO3、Na2SO4、Ba（OH）2、BaCl2中的一种或几种组成，现做如下实验：（Ⅰ）：将少量粉末放在烧杯中加足量水，搅拌、静置、过滤，得无色溶液及白色沉淀；（Ⅱ）：向（Ⅰ）过滤得到的白色沉淀中加足量稀硝酸，沉淀全部溶解并有气体产生：（Ⅲ）：向（Ⅰ）过滤得到的滤液中滴加硝酸银溶液，立即有较下的白色沉淀生成，再加稀硝酸，沉淀不溶解．根据以上实验现象推断：白色粉末中①一定存在的是&&&&，②一定不存在的是&&&&，③可能存在的是&&&&（2）A、B、C、D、E五种化合物中，A为白色固体，B为无色、无气味的气体，E为不溶于稀硝酸的白色沉淀．根据图示回答下列问题：①若现象a为“无明显变化”，则只含有三种元素的A的化学式可能为&&&&②若现象a为“无色有刺激性气味的气体”，则A的化学式可能为&&&&．
（2010o常德）在校园文艺节上，萌萌同学表演的“水能生火“的化学小魔术博得了满堂彩，她向包有过氧化钠（Na2O2）粉末的脱脂棉上滴水，脱脂棉燃烧起来．事后她对这魔术的化学原理很感兴趣，于是便和同学们一起探究起来．【提出问题】①过氧化钠和水反应生成了什么物质？②脱脂棉为什么会燃烧？【大胆猜想】①可能生成了一种气体和另一种物质．②反应过程可能有能量变化．【设计装置】萌萌他们组装了如右图的装置进行实验．其中分液漏斗可通过活塞控制液流速度，吸滤瓶右侧有支管可导出气体（瓶内为空气）．【实验探究】探究l：反应生成的气体物质是什么？探究2：脱脂棉为什么会燃烧？（1）打开分液漏斗活塞，以适当的速度将水滴入Na2O2中，观察到试管内有气泡产生，用带火星的木条靠近P处，木条复燃．说明反应生成的气体是&&&&．（2）实验中还观察到与吸滤瓶连接的导管在盛水的烧杯中有气泡冒出，试解释产生该现象的原因&&&&，这一现象为&&&&找到了依据．探究3：反应生成的另一种产物是什么？（1）同伴强强猜想另一种物质是Na2CO3，萌萌认为不可能，萌萌的依据是&&&&．如果你同意萌萌的意见，请你完成下表：
&&&&实验步骤&&&&&实验现象&&&&&实验结论&&&&&取少量探究1反应后的溶液于试管中，加入稀盐酸．&&&&&&&&&&&（2）萌萌再取探究l反应后的溶液于试管中，滴入无色酚酞试液变红色，说明反应后所得的溶液呈&&&&性，则这种产物应该为（写化学式）&&&&．【作出结论】由实验探究的结果，萌萌他们得出过氧化钠与水反应的化学方程式是&&&&．
“（2013o潍坊）某研究性学习小组设计了...”的最新评论
该知识点好题
1用如图装置（图中夹持仪器已略去）测定某牙膏样品中碳酸钙的质量分数．实验中，通过测定丙装置质量的改变值，就能达到目的（样品中其他成分遇盐酸不产生气体）．下列措施能提高测定准确度的是（　　）
2乌鲁木齐市的冬季，大雪覆盖地面，给交通带来不便．撒融雪剂可以使雪很快融化，有效的缓解交通压力，请回答：（1）冬季清雪，除使用融雪剂融雪外，还使用除雪车铲雪，除雪车的铲斗是用锰钢制造的，锰钢属于&&&&．A．合成材料 B．合金&&C．金属材料&&D．化合物（2）某种融雪剂可能是由NaCl、CaCl2、CuSO4中的一种或两种物质组成，小明为探究其成分，做了以下实验：根据以上实验，请你推断：（i）该融雪剂一定不含有&&&&，一定含有&&&&（填化学式）．（ii）写出第Ⅱ步反应的化学方程式&&&&．（iii）第Ⅲ步操作名称是&&&&．（iv）融雪剂的大量使用会给环境带来一些危害．请你写出融雪剂对环境的一种危害或提出道路除雪的一条合理化建议&&&&．
3我国著名的闽籍制碱专家侯德榜，在纯碱制造方面做出了重大贡献．用“侯氏制碱法”制得的纯碱中常含有氯化钠等杂质，化学兴趣小组欲对某品牌纯碱样品中碳酸钠的质量分数进行实验探究，在老师的指导下，他们设计了下列两种实验方案进行试验．资料摘要：Ⅰ．碳酸钠和氯化钙能发生复分解反应．Ⅱ．浓硫酸具有很强的吸水性；碱石灰常用于吸收水蒸气和二氧化碳．[方案一]样品与氯化钙溶液反应，测定Na2CO3的质量分数（1）样品与氯化钙溶液的反应实验（杂质不与氯化钙溶液反应）：
实验操作&实验现象&实验结论&取一定量纯碱样品配成溶液后，滴加过量的CaCl2溶液．&产生白色沉淀&反应的化学方程式：&&&&&（2）分析滴加的CaCl2溶液要过量的原因：&&&&；（3）将反应后的混合物进行过滤，把获得的沉淀物进行洗涤、干燥、称量．利用沉淀物质量计算Na2CO3的质量分数为91%．如果不洗涤沉淀物会造成测定结果大于91%，这是因为&&&&．[方案二]样品与稀盐酸反应，测定Na2CO3的质量分数利用下图所示实验装置（铁架台略去）和试剂，通过测定样品和稀盐酸反应产生的CO2气体的质量，计算Na2CO3的质量分数（装置气密性良好，忽略盐酸的挥发性且每步反应或作用都是完全的）．（4）打开止水夹K，先对装置A和B（已连接）通入已除去CO2的空气一会儿，以排尽装置A和B中含有的&&&&，再接上装置C和D．（5）关闭止水夹K，加入足量的稀盐酸（杂质不与盐酸反应），装置A中样品产生气体的化学方程式为&&&&．（6）待装置A中的反应结束后，再一次打开止水夹K，继续往装置通入已除去CO2的空气一会儿．根据&&&&&定律，装置&&&&（填标号）在反应前后的质量差就是产生CO2的质量，由此计算出该样品中Na2CO3的质量分数．若没有装置D，将会使测定结果&&&&（选填“偏大”或“偏小”）．
该知识点易错题
1甲、乙两个化学兴趣小组的同学为测定某地石灰石的质量分数（杂质不参与反应），分别设计方案并进行实验．甲组：（1）实验：取石灰石样品10g，高温煅烧至质量不再改变后，把剩余固体放在密闭、干燥的容器中冷却至室温，称量所得固体的质量为6.04g．（2）计算：设石灰石中碳酸钙的质量为xCaCO3&&高温&&CaO+CO2↑100&&&&&&&&&56x&&&&&&&&&&&6.04g以上解法得出碳酸钙的质量分数超过100%，造成计算结果错误的原因是&&&&．请你写出正确的计算过程．乙组：也取原石灰石样品10g，按下图所示装置（气密性完好）进行实验，测得完全反应后C中氢氧化钠溶液增重了3.9g．由此计算出碳酸钙的质量分数要比甲组&&&&（填高或低或相同），造成该结果的原因可能是&&&&．乙组实验设计也有不足之处，你的改进是&&&&．
2某校化学兴趣小组对一种工业废水按下列步骤进行实验（假设能发生的反应均恰好完全反应）：根据以上实验事实，用化学式回答：（1）当废水溶液中仅含一种溶质时，该溶质是&&&&．（2）当废水溶液中仅含多种溶质时，除（1）中的溶质外，还可能存在的盐是&&&&，&&&&，&&&&．
3有一干燥的还原性气体是由H2、CO中的一种或两种组成，为了确定它的成份，化学兴趣小组设计如下装置进行实验．由此回答：（1）写出a、b仪器的名称：a&&&&，b&&&&；（2）若看到B装置中固体变蓝色，C装置中溶液无变化，证明该气体是&&&&；若看到B装置中固体变蓝色，C装置中溶液变浑浊，证明该气体是&&&&．（3）B、C装置连接顺序能否颠倒？请说出理由．&&&&．（4）该实验装置设计考虑不周密，请写出你的改进方法．&&&&．
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