----> 第十四章分子荧光分析法主讲
第十四章分子荧光分析法主讲
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&&&&第十四章分子荧光分析法&&&&主讲：郭伟监督电话：3029128&&&&&&&&光谱法：光谱法：&&&&按电磁辐射的能级跃迁方向分：吸收光谱法（从基态跃迁到激发态）吸收光谱法（从基态跃迁到激发态）发射光谱法（激发态跃迁回基态）发射光谱法（激发态跃迁回基态）按电磁辐射的作用对象分：原子光谱分子光谱&&&&&&&&紫外及可见分光光度法：紫外及可见分光光度法：分子吸收光谱法分子荧光分析法：分子荧光分析法：分子发射光谱法发光分析法&&&&&&&&第一节概述&&&&物质分子吸收了一定能量后其电子由基态跃迁至激发态,物质分子吸收了一定能量后,其电子由基态跃迁至激发态,一定能量当激发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时,当激发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时,便产生分子发光。根据这种现象建立的分析方法称为发光分析法发光分析法。子发光。根据这种现象建立的分析方法称为发光分析法。根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：几类：光致发光：光源来激发而发光光致发光：以光源来激发而发光发射电致发光：电能来激发而发光电致发光：以电能来激发而发光生物发光：生物体释放的能量激发而发光生物发光：以生物体释放的能量激发而发光化学发光：化学反应能激发而发光化学发光：以化学反应能激发而发光&&&&&&&&光致发光包括荧光和光致发光包括荧光和磷光荧光荧光包括分子荧光和荧光包括分子荧光和原子荧光分子荧光分子荧光分析法：根据物质的分子吸收光能后发射出的荧光光谱的特征和强度，对物质进行定性和定量的分析方法。优点：灵敏度高，比紫外可见光谱法高2-4个数量灵敏度高，比紫外可见光谱法高2灵敏度高选择性好。级；选择性好。缺点：应用范围小。&&&&&&&&第二节&&&&&&&&基本原理&&&&&&&&一、分子荧光的发生过程基态分子中，电子按能量最低原理成对地排列于一定的轨道中分子内同一轨道中两个电子必须有相反的自旋方向，即自旋量子数分别为1/2和-1/2.总自旋量子数：S=&&&&&&&&∑Si&&&&&&&&分子的多重性：M=2S+1M=2S+1&&&&&&&&S=0，M=1&&&&&&&&S=1，M=3&&&&&&&&电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量，称为去激发过程。&&&&传递途径辐射跃迁无辐射跃迁&&&&&&&&荧光&&&&&&&&磷光&&&&&&&&系间跨越&&&&&&&&内转换&&&&&&&&外转换&&&&&&&&振动弛豫&&&&&&&&非辐射能量传递过程振动弛豫(vibrationalrelexation)：各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递给溶剂分子，其电子返回到同一电子能级的最低振动能级间的过程；发生振动弛豫的时间10-12s。内部转换(internalconversion)：当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。&&&&&&&&外部能量转换(externalconversion)：激发分子与溶剂或其他溶质分子之间相互碰撞失去能量，并以热能的形式释放能量的过程。外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。体系间跨越(intersystemcrossing)：处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程；分子由激发单重态通过体系间跨越到激发三重态。条件：激发态的振动能级有重叠时宜发生。&&&&&&&&辐射能量传递过程荧光发射：激发分子从第一激发单重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为荧光；荧光辐射能要比激发能量低，荧光波长大于激发波长；荧光是相同多重态间的允许跃迁，产生速度快，荧光发射时间为10-9-10-7s。磷光发射：激发分子由第一激发三重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级时所产生的光子辐射称为磷光；磷光辐射能要比荧光辐射能量低，磷光波长大于荧光波长；磷光发射时间为10-4-10s。&&&&&&&&荧光：第一激发单重态的最低振动能级→基态荧光：10-7～10-9s,第一激发单重态的最低振动能级基态；第一激发单重态的最低振动能级基态；磷光：基态；磷光：10-4～10s；第一激发三重态的最低振动能级基态；；第一激发三重态的最低振动能级→基态&&&&&&&&二、激发光谱和荧光光谱激发光谱（激发光谱（excitationspectrum）：固定荧光波）改变激发光波长，长，改变激发光波长，测定不同波长光照射下荧光强度的变化，强度的变化，以激发波长为横坐标，为横坐标，荧光强度为纵坐标，坐标，可得荧光物质的激发光谱。发光谱。&&&&&&&&萘的激发光谱、荧光和磷光光谱&&&&&&&&注：相当于荧光物质的吸收光谱。激发荧光最灵敏波长（λex）是荧光强度最大所对应波长。&&&&&&&&荧光光谱（荧光光谱（fluorecencespectrum）：固定激发光）：固定激发光）：波长为最大激发波长，波长为最大激发波长，测定不同荧光波长下的荧光强度，以发射波长为横坐强度，标，荧光强度为纵坐标作得到荧光发射光谱。图，得到荧光发射光谱。&&&&最大荧光波长（λem）：光谱上荧光强度最大的波长。&&&&萘的激发光谱、荧光和磷光光谱&&&&&&&&荧光物质的最大激发波长（λex）和最大发射波长（λem）荧光物质的最大激发波长（）和最大发射波长（）是鉴定物质的根据；也是定量测定最为灵敏的条件。是鉴定物质的根据；也是定量测定最为灵敏的条件。&&&&&&&&荧光光谱的特征1、荧光光谱与激发光波长无关电子跃迁到不同激发态能级，电子跃迁到不同激发态能级，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，从而荧光发射光谱只有一个发射带，而且荧光光谱的形状与发射光谱只有一个发射带，激发波长无关。激发波长无关。2、荧光波长比激发波长较长:荧光波长比激发波长较长:荧光发射能量以激发能量低，荧光发射能量以激发能量低，故荧光发射波长总是大于激发光谱波长，这种现象又称红移。是大于激发光谱波长，这种现象又称红移。光谱图中，激发光谱总是在左发射光谱总是在右光谱图中，激发光谱总是在左，发射光谱总是在右。总是在总是在&&&&&&&&3、激发光谱与荧光光谱呈现镜像对称关系&&&&0V=2V=1V=0&&&&&&&&a&&&&&&&&b1cc10b0b2c2b4&&&&280&&&&&&&&蒽的激发光谱（虚线）蒽的激发光谱（虚线）荧光光谱（实线）荧光光谱（实线）&&&&&&&&b3&&&&360440&&&&&&&&c3c4&&&&520nm&&&&?E4?E3?E2?E1&&&&?1&&&&&&&&S&&&&&&&&蒽的能级跃迁b4b3b2b1b0c0c1c2c3c4&&&&?E4?E3?E2?E1&&&&&&&&V=4V=3V=2V=1V=0&&&&&&&&S0&&&&&&&&三、荧光与物质的分子结构荧光物质应具备的条件：荧光物质应具备的条件：分子具有强的吸收紫外可见辐射的结构（内因）1、分子具有强的吸收紫外可见辐射的结构（内因）2、具有较高的荧光效率（一）荧光发射的量子产率&&&&kF发射的荧光量子数?==kF+∑ki吸收的光量子数KF荧光发射的速率常数，∑ki无辐射跃迁的速率常数之和；荧光发射的速率常数，之和；&&&&&&&&荧光效率与物质的分子结构和所处的化学环境条件有关。条件有关。&&&&&&&&（二）分子结构与荧光荧光物质的分子结构应具备如下特征：荧光物质的分子结构应具备如下特征：1.共轭结构（芳香族烃）&&&&&&&&λex&&&&&&&&205nm&&&&&&&&286nm321nm0.29&&&&&&&&356nm404nm0.36&&&&&&&&λem278nm?0.11&&&&&&&&通常，通常，具有π―π*跃迁结构的分子最容易产生荧光而且共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移。而且共轭度越大，荧光效率越大，荧光波长长移。&&&&&&&&2.分子的刚性&&&&分子刚性越强，分子振动越少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光效率提高。&&&&OOCCOOO&&&&OCCOOO&&&&&&&&荧光素&&&&&&&&Φ=0.92，0.1MNaOH&&&&&&&&酚酞&&&&&&&&非荧光物质&&&&&&&&3.取代基对分子荧光的影响①给电子基团如-NH2、-OH、-OCH3、-CN等，使荧光增强。&&&&②吸电子基团如-COOH、-NO2、-C=O、-F、-Cl等会减弱甚至破坏荧光。&&&&&&&&四、荧光强度与溶液浓度的关系I&&&&0&&&&&&&&IF&&&&&&&&I=I0?10&&&&&&&&?abc&&&&&&&&I0?I=I0?I010?abc=I0(1?10?abc)&&&&&&&&溶液的荧光强度F与溶液吸收光的强度及荧光效溶液的荧光强度F率成正比F=k?I0(1?10?abc)=k?I0(1?e?2.3abc)&&&&(?2.3abc)(?2.3abc)2(?2.3abc)3F=k?I0[1?(1++++L)]1!2!3!&&&&&&&&当≤0.05时F=2.3k?I0abc=KCabc，&&&&&&&&F=KC&&&&(荧光定量分析法的依据)荧光定量分析法的依据)&&&&&&&&结论：对某一物质的稀溶液（A=abc0.05），在一定条件下，当激发光波长、强度和液层厚度固定时，物质发出的荧光强度与该溶液的浓度呈正比。&&&&&&&&五、影响荧光强度的外部因素（一）溶剂的影响1、荧光强度在一定范围内可随溶剂粘度的减小而减小。减小。溶剂和荧光物质反应，2、溶剂和荧光物质反应，会使荧光峰的波长和荧光强度改变。光强度改变。随着溶剂的极性的增加，荧光物质的π→π*π→π*跃3、随着溶剂的极性的增加，荧光物质的π→π*跃迁几率增加，荧光强度将增强，迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也发生红移。溶剂纯度。溶剂中有杂质会影响荧光光谱。4、溶剂纯度。溶剂中有杂质会影响荧光光谱。&&&&&&&&（二）温度的影响温度增加，荧光效率和荧光强度下降。（三）酸度的影响pH影响荧光物质的存在形式影响荧光物质的存在形式&&&&无荧光蓝色荧光OHH+无荧光OHH+&&&&&&&&NH3+&&&&pH2&&&&&&&&NH2&&&&7pH12&&&&&&&&NHpH13&&&&&&&&pH影响荧光配合物的组成pH影响荧光配合物的组成Ga3++邻－二羟基偶氮苯1:1配合物产生荧光)1:1配合物(产生荧光)配合物(pH6~73++邻－二羟基偶氮苯Ga1:2配合物不产生荧光)配合物(1:2配合物(不产生荧光)&&&&pH3~4&&&&&&&&（四）荧光猝灭&&&&荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度不与浓度成线性关系的现象称为荧光猝灭。能引起荧光猝灭的物质叫荧光熄灭剂能引起荧光猝灭的物质叫荧光熄灭剂&&&&&&&&导致荧光熄灭的原因：&&&&碰撞猝灭静态猝灭转入三重态的猝灭荧光物质的自猝灭内滤作用激发光或发射光M+热M+hv→M*,M*+Q→M+热M+Q→MQ非荧光物质引入碘、溴后，引入碘、溴后，易发生体系间跨越荧光物质浓度较高溶液中有其它物质吸收荧光物质的&&&&&&&&荧光猝灭法（fluorescencequenchingmethod）：荧光物质加入某些猝灭剂后，其荧光强度的减少与荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，可用于测定猝灭剂的含量。比直接荧光法更灵敏、更有选择性。&&&&&&&&（五）散射光1.瑞利散射光子与物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，运动方向改变；λ瑞利光＝λ入射光2.拉曼散射光子与物质分子发生非弹性碰撞，发生能量交换，运动方向改变；λ拉曼光≠λ入射光3.丁铎尔散射散射光对荧光测定有干扰，散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光拉曼光，更长的拉曼光因其波长与荧光波长接近，更长的拉曼光，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定干扰更大，必须消除。测定干扰更大，必须消除。&&&&&&&&第三节荧光分析仪器&&&&荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色器、荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色器、发射单色器、样品池、检测系统、显示系统。发射单色器、样品池、检测系统、显示系统。&&&&激发单色器光源发射单色器示器?示器器栩器检测器样品池&&&&&&&&与分光光度计有两点不同：有两点不同：①两个单色器②检测器与激发光成直角&&&&&&&&1、光源理想的光源能发射含有各种波长的紫外和可见且光强度较大。光，且光强度较大。荧光光度计中，常使用高压汞灯和卤钨灯高压汞灯和卤钨灯作光源荧光光度计中，常使用高压汞灯和卤钨灯作光源荧光分光光度计中常用高压氙灯高压氙灯作光源荧光分光光度计中常用高压氙灯作光源2、单色器荧光光度计用滤光片作单色器，荧光光度计用滤光片作单色器，不能进行荧光光谱和激发光谱的扫描；和激发光谱的扫描；大多数荧光分光光度计一般采用两个光栅单色器，大多数荧光分光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱。有较高的分辨率，能扫描图谱。&&&&&&&&第一单色器作用：分离出所需要的激发光，第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长，佳激发波长，用此激发样品池内的荧光物质第二单色器作用：第二单色器作用：滤掉一些溶剂的散射光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长。在发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长。选定的荧光波长下测定荧光强度，定量分析。选定的荧光波长下测定荧光强度，定量分析。3、样品池盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，都透光，只能用手拿棱或最上边4、检测器荧光的强度一般较弱，荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管5、放大指示器&&&&&&&&SK-2003A型荧光光谱仪国内首创）型荧光光谱仪(国内首创型荧光光谱仪国内首创）&&&&&&&&第四节荧光分析方法和应用&&&&一、定性分析荧光物质的特征光谱有激发光谱荧光光谱两激发光谱和荧光物质的特征光谱有激发光谱和荧光光谱两种，可以将荧光物质的特征光谱与标准物质的光谱比较，以确定是否为同一物质。比较，以确定是否为同一物质。二、定量分析F定量分析依据F=KC1.标准曲线法1.标准曲线法步骤：步骤：FX1.配制不同浓度的标准溶液1.配制不同浓度的标准溶液2.做3.求得浓度2.做F～C关系曲线3.求得浓度注意：固定仪器和测定条件；注意：固定仪器和测定条件；试样浓度在线性范围内&&&&?&&&&&&&&?&&&&?&&&&?&&&&&&&&?&&&&&&&&?&&&&&&&&CX&&&&&&&&C&&&&&&&&2、直接比较法步骤：步骤：1.配制标准溶液和试样溶液1.配制标准溶液和试样溶液2.测2.测F3.求浓度3.求浓度&&&&FS?F0=KCS&&&&FS?F0CS=FX?F0CX&&&&&&&&FX?F0=KCX&&&&&&&&注意：样品与标样溶液浓度接近，注意：样品与标样溶液浓度接近，在线性范围内&&&&&&&&三、荧光分析法的应用有机物的荧光分析芳香族及具有芳香结构的有机化合物在紫外光照射下大多数能产生荧光，射下大多数能产生荧光，某些弱荧光物质可与荧光剂作用生成强荧光物质。剂作用生成强荧光物质。1.油脂苯并油脂苯并（芘测定：1.油脂苯并（a）芘测定：油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定，油样经提取、浓缩、纯化后进行荧光测定，λex＝386nm、λem＝406nm。、＝。2.尿中尿中N甲基尼克酰胺的测定：2.尿中N1－甲基尼克酰胺的测定：尿液经纯化、尿液经纯化、碱处理和酮缩合成为带有黄色荧光的衍生物，生物，在酸性溶液中加热变成稳定而产生强蓝色荧光的物质,的物质,λex＝355nm、λem＝430nm。、＝&&&&&&&&3.1-甲氨基－3.1-2-甲氨基－5－氯化磺酰萘(Dansyl-Cl,DNS氯化磺酰萘ce丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：丹酰氯）用于氨基酸的荧光测定：DNS-Cl是一种荧光试剂，DNS-C1能与所有的氨是一种荧光试剂，是一种荧光试剂能与所有的氨基酸生成具荧光的衍生物，在碱性条件下与氨基基酸生成具荧光的衍生物，肽或蛋白质)的氨基结合成带有荧光的DNS酸(肽或蛋白质)的氨基结合成带有荧光的氨基酸(DNS-肽或DNS-蛋白质)，DNS-氨基酸氨基酸(-肽或-蛋白质)在紫外光照射下呈现黄色荧光。&&&&&&&&无机物的荧光分析很多金属或非金属无机离子与一些有机化合物形成有荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定量分析。有荧光的配合物，测定荧光强度可以进行定量分析。常用的试剂：常用的试剂：1.8－羟基喹啉及其衍生物：用于、Ga、In、Sc、－羟基喹啉及其衍生物：用于Al、、、、La、Mg、Zn、Cd等元素的荧光测定。、、、等元素的荧光测定等元素的荧光测定。2.黄酮类试剂：桑色素、黄烷醇、2.黄酮类试剂：桑色素、黄烷醇、槲皮素黄酮类试剂用于Ⅱ用于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ族元素的荧光测定3.二氨基化合物：用于测定3.二氨基化合物：用于测定Se二氨基化合物&&&&&&&&核酸分子荧光探针自身的荧光效率很低，遗传物质的脱氧核糖酸(DNA),自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到DNA的荧光，因此，常选用的荧光，一般条件下几乎检测不到的荧光因此，某些荧光分子作为探针荧光分子作为探针，某些荧光分子作为探针，通过探针标记分子的荧光变与小分子及药物的作用机理，化来研究DNA与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子为溴化乙锭，型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光染料荧光染料作为标物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光染料作为标记物来代替同位素标记，记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。&&&&&&&&核酸分子荧光探针自身的荧光效率很低，遗传物质的脱氧核糖酸(DNA),自身的荧光效率很低，一般条件下几乎检测不到DNA的荧光，因此，常选用的荧光，一般条件下几乎检测不到的荧光因此，某些荧光分子作为探针荧光分子作为探针，某些荧光分子作为探针，通过探针标记分子的荧光变与小分子及药物的作用机理，化来研究DNA与小分子及药物的作用机理，从而探讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,讨致病原因及筛选和设计新的高效低毒药物。目前,典型的荧光探针分子为溴化乙锭，型的荧光探针分子为溴化乙锭，此外也使用钉的配合物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光染料荧光染料作为标物等。在基因检测方面，已逐步使用荧光染料作为标记物来代替同位素标记，记物来代替同位素标记，从而克服了同位素标记物产生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。生的污染,价格昂贵及难保存等的不足。&&&&&&&&本章小结&&&&掌握分子荧光产生机理掌握激发光谱和发射光谱的产生以及发射光谱特征掌握荧光与分子结构的关系以及荧光强度的影响因素掌握荧光定量分析方法及荧光分光光度计习题：习题：2,6&&&&&&&&1.盐桥的作用是消除（1.盐桥的作用是消除（）盐桥的作用是消除A.不对称电位B.液接电位C.接触电位D.相间电位A.不对称电位B.液接电位C.接触电位D.相间电位在实际测定溶液pHpH时都用pH标准溶液来校正电极，pH标准溶液来校正电极2.在实际测定溶液pH时，都用pH标准溶液来校正电极，其目的是消除何种影响（）的是消除何种影响（A.不对称电位B.液接电位A.不对称电位B.液接电位D.温度C.不对称电位和液接电位D.温度玻璃电极使用前浸泡的目的是（3.玻璃电极使用前浸泡的目的是（）A.活化电极B.清洗电极A.活化电极B.清洗电极C.校正电极D.检查电极性能C.校正电极D.检查电极性能pH玻璃电极膜电位的产生是由于玻璃电极膜电位的产生是由于(4．pH玻璃电极膜电位的产生是由于()A．电子得失B．氢电子透过玻璃膜C．溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中氢离子产生离子交换和扩散D．溶液中氢离子和玻璃膜表面水化凝胶层中钠离子产生离子交换和扩散&&&&&&&&5．当pH玻璃电极测量超出其使用的pH范围的溶液时，测量值pH玻璃电极测量超出其使用的pH范围的溶液时，玻璃电极测量超出其使用的pH范围的溶液时将发生“酸差”碱差”酸差”碱差”将发生“酸差”和“碱差”。“酸差”和“碱差”使得测量pH值将(pH值将()值将A．偏高和偏高B．偏低和偏低C．偏高和偏低D．偏低和偏高参比电极的作用是(6．参比电极的作用是()A．保持离子强度一致B．提供标准电极电位调节适宜的pHpH范围C．调节适宜的pH范围D．消除干扰TISAB由________、________和________三部分组成三部分组成。7.TISAB由________、________和________三部分组成。8.电化学分析中盐桥中的电解质溶液应符合的要求是________；________。________；________。&&&&&&&&1.下列参数中，不属于紫外可见分光光度法定性的参数是（）1.下列参数中，不属于紫外可见分光光度法定性的参数是（）下列参数中A.λA.λmaxB.AC.吸收光谱形状D.εmax紫外可见法测定中，如果显色剂在测定波长处也有吸收，2.紫外可见法测定中，如果显色剂在测定波长处也有吸收，则空白应选用（）空白应选用（）A.溶剂空白B.平行操作空白A.溶剂空白B.平行操作空白D.试剂空白C.试样空白D.试剂空白某显色剂在pH小于6时为黄色，12时为橙色大于12pH小于时为橙色，12时为3.某显色剂在pH小于6时为黄色，6-12时为橙色，大于12时为红色，该显色剂与某金属离子形成的红色配合物，红色，该显色剂与某金属离子形成的红色配合物，则该显色反应应在（）应应在（）A.弱酸性溶液中进行B.弱碱性溶液中进行A.弱酸性溶液中进行B.弱碱性溶液中进行D.任意pH条件下进行任意pHC.强碱性溶液进行D.任意pH条件下进行摩尔吸光系数与下列因素有关的是（）4.摩尔吸光系数与下列因素有关的是（）A.入射光波长B.待测物浓度A.入射光波长B.待测物浓度D.入射光强度C.比色皿厚度D.入射光强度&&&&&&&&5．双波长分光光度计的输出信号是(双波长分光光度计的输出信号是()A．试样吸收与参比吸收之差B．试样与参比吸收之和试样在λ试样在λC．试样在λ１和λ2处吸收之差D．试样在λ１和λ2处吸收之和分光光度分析中比较适宜的吸光度范围是(6．分光光度分析中比较适宜的吸光度范围是()B．A．0.1~1.2B．0.2~0.8D．C．0.05~0.6D．0.2~1.5双光束与单光束分光光度计相比，其突出优点是(7．双光束与单光束分光光度计相比，其突出优点是()A．可以扩大波长的应用范围B．可以采用快速响应的检测系统C．可以抵消吸收池所带来的误差D．可以抵消因光源的变化而产生的误差符合LambertBeer定律的某有色溶液Lambert－定律的某有色溶液，8．符合Lambert－Beer定律的某有色溶液，当有色物质的浓度增加时，最大吸收波长和吸光度分别是(加时，最大吸收波长和吸光度分别是()不变，不变，A．不变，增加B．不变，减小向长波移动，向短波移动，C．向长波移动，不变D．向短波移动，不变&&&&&&&&荧光光度计中第一单色器的作用是（）1.荧光光度计中第一单色器的作用是（）A.消除杂质荧光A.消除杂质荧光B.得到合适的单色激发光B.得到合适的单色激发光C.消除激发光产生的反射光C.消除激发光产生的反射光D.消除瑞利散射消除瑞利散射、D.消除瑞利散射、拉曼散射硫酸奎宁在0.05M硫酸中，分别用320nm350nm波长的光320nm和2.硫酸奎宁在0.05M硫酸中，分别用320nm和350nm波长的光激发，所得到的荧光光谱（）激发，所得到的荧光光谱（）A.形状和强度都相同B.形状和强度都不同A.形状和强度都相同B.形状和强度都不同C.形状相同形状相同，D.强度相同强度相同，C.形状相同，强度不同D.强度相同，形状不同为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）3.为使荧光强度和荧光物质溶液的浓度成正比，必须使（）A.激发光足够强B.摩尔吸光系数足够大A.激发光足够强B.摩尔吸光系数足够大C.试样溶液足够稀D.仪器的灵敏度足够高C.试样溶液足够稀D.仪器的灵敏度足够高&&&&&&&&4．下列说法正确的是(下列说法正确的是()A．分子的刚性平面有利于荧光的产生B．磷光辐射的波长比荧光短C．磷光比荧光的寿命短D．荧光猝灭是指荧光完全消失5．分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低振动能级跃至基态中各振动能级产生的光辐射，他们的主要区别在于(基态中各振动能级产生的光辐射，他们的主要区别在于()A．分子的电子层不同B．跃至基态中的振动能级不同C．产生光辐射的能源不同D．无辐射弛豫的途径不同产生荧光发射时，分子应处于______________________________。6.产生荧光发射时，分子应处于_______________。&&&&&&&&分享给好友:
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贡献者：Jago_loa
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&药品质量检测技术 第九章
仪器分析法
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