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76一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法
一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法；1MTris-HCl(pH7.4，7.6，8.0；组份浓度1MTris-HCl；配制量1L；配制方法1.称量121.1gTris置于lL烧杯；2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解；5.高温高压灭菌后，室温保存；注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tr；化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低；1.
　一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)组份浓度
1 M Tris-HCl配制量
1L配制方法
1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度
1.5 MTris-HCl配制量
1 L配制方法
1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓HCl调节pH值至8.8。4.将溶液定容至1 L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0) 组份浓度
100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA配制量
1 L配制方法
3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4.室温保存。3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度
3 M醋酸钠配制量
100 ml配制方法
1.称量40.8 g NaOAc?3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。3.加去离子水将溶液定容至100 ml。4.高温高压灭菌后，室温保存。PBS Buffer组份浓度
137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
1 L配制方法 3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M醋酸铵组份浓度
10 M醋酸铵配制量
100 ml配制方法
1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100 ml。3.使用0.22 μm滤膜过滤除菌。4.密封瓶，室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法
1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。④重复操作步骤③。⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇配制方法
l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。10%(W/V)SDS组份浓度
10%(W/V)SDS配制量
100 ml配制方法
1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。2 N NaOH组份浓度
2 N NaOH配制量
100 ml配制方法
1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。2.5 N HCl组份浓度
2.5 N HCl配制量
100 ml配制方法
1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。2.室温保存。5 M NaCl组份浓度
5 M NaCl配制量
1 L配制方法
1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4℃保存。20%(W/V)Glucose(葡萄糖)组份浓度
20%(W/V)Glucose配制量
100 ml配制方法
1.称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。3.高温高压灭菌后，4℃保存。Solution l (质粒提取用)组份浓度
25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose配制量
1 L配制方法3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。Solution Ⅱ(质粒提取用)组份浓度
200 mM NaOH，1%(W/V)SDS配制量
500 ml配制方法
3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。Sol ution Ⅲ(质粒提取用)组份浓度
3 M KOAc，5 M Ethanoic acid (乙酸)配制量
500 ml 配制方法3.加去离子水将溶液定容至500 ml。4.高温高压灭菌后，4℃保存。0.5 M EDTA (pH8.0)组份浓度
0.5 M EDTA配制量
1 L配制方法
1.称取186.1 g Na2EDTA?2H2O，置于1 L烧杯中。2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4加去离子水将溶液定容至1 L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。1 M DTT组份浓度
1 M DTT配制量
20 ml配制方法
1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 μm滤膜过滤除菌。3.适量分成小份后，-20℃保存。10 mM ATP组份浓度
10 mM ATP配制量
20 mL配制方法
1.称取121 mg Na2ATP?3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20℃保存。二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)组份浓度
30%(W/V)Acrylamide配制量
1 L配制方法 3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 μm滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4℃保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。包含各类专业文献、应用写作文书、行业资料、幼儿教育、小学教育、各类资格考试、高等教育、文学作品欣赏、外语学习资料、专业论文、中学教育、76一、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法等内容。　
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