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痰标本直接涂片检查与细菌培养结果分析
日 10:19:01 Wednesday&&
作者：孟文杰
冯衍红&&&&作者单位：250400山东济南平阴县人民医院
【关键词】& 痰标本 直接涂片 细菌培养
　　肺部病原菌的检出对肺部感染性疾病的诊断性治疗具有重要意义。尽管目前痰培养还存在许多问题，但仍是最常用且具参考价值的方法之一。获取合格的痰标本，既节省人力、物力，又可减少病人的诊疗费用，现将本院230份痰标本进行直接涂片与细菌培养结果比较分析如下。
　　资料与方法
　　一般资料：230例患者中，男149例，女81例，年龄51～72岁，平均65岁，其中呼吸内科104例（45.2%），疾病种类有：慢性支气管炎47例，肺心病16例，肺炎22例，肺气肿11例，咯血待查5例，支气管扩胀3例，其他科室126例（54.8%）。
　　方法：①标本采集：病人于清晨温开水漱口，用力咳出深部第一口痰，吐在无菌瓶中送检。直接涂片：收到标本后用无菌接种环涂片2张，1张直接镜检，将标本根据每低倍镜视野见白细胞、上皮细胞量分为：白细胞＞25/LP，上皮细胞＜25/LP为合格，适合做培养，白细胞＜10/LP，上皮细胞＞25/LP为不合格应重取标本。另一张涂片待干燥后，做革兰染色镜检，观察细菌形态。②培养：质量合格的痰标本接种血平板和巧克力培养基，放35℃或CO2孵箱培养24～48小时。③病原菌鉴定：取纯培养菌或优势菌严格按全国临床操作规程进行鉴定。
　　230份标本经直接涂片质量鉴定有160份为合格标本，合格率为69.5%，培养阳性的有121份，阳性率为75.6%，其中细菌91株，真菌30株。病原菌分布为：革兰阳性菌检出数25例，检出率20.7%，主要菌种为肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、A群链球菌和凝固酶阴性葡萄球菌；革兰阴性杆菌检出数66例，检出率54.5%，主要菌种为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌、嗜素芽假单孢菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌和不动杆菌；真菌检出数30例，检出率24.8%，其主要菌种为白色念珠菌、光滑假丝酵母菌和热带菌和热带假丝酵母菌。呼吸内科104例标本合格74例（71.1%），细菌培养阳性57例（54.87%）。
　　痰标本在培养前先做涂片检查是呼吸道标本细菌学检验的原则之一。国内有人报导纤支镜取痰质量合格痰的培养阳性率差异无显著性，但纤支镜取痰由于种种原因不能普及，在此情况下，坚持对痰培养标本进行直接涂片镜检，对合格标本进行培养，不合格标本请病人重留，既避免了医疗浪费，又避免了不合格标本产生的假阴性或假阳性给医生的误导。本文160份合格痰标本中检出121株病原菌，均与临床诊断相符，培养阳性率75.6%，与国内报导的纤支镜取痰培养阳性率73.7%相近。
　　本文160份合格痰样本中共检出细菌91株，真菌30株，革兰阴性杆菌检出率明显多于革兰阳性球菌。其主要菌种与目前临床常见病原菌一致。真菌检出率24.8%，以白色念株菌为主，主要是由于杭生素使用不合理导致菌群失调所致。
　　160份合格痰标本中，涂片检菌和培养同时阳性96份（60%），涂片检菌和培养同时阴性24份（15%），两者符合率达到75%，说明涂片对培养出病原菌的判断有辅助意义。涂片阴性培养阳性可能由于细菌量少或镜检不仔细所致。涂片阳性培养阴性，可能是细菌不易存活或是由厌氧菌感染，普通培养不能生长所致。
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　　【关键词】 痰涂片 分枝杆菌
　　【中图分类号】R730.43 【文献标识码】A 【文章编号】（9-01
　　结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3 感染结核分枝杆菌。据WH O 报道，每年约有800 万新病例发生，至少有300 万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300 人/10 万，居各种疾病死亡原因之首。实验室在探讨应用简便可靠的方法快速检出结核菌方面取得了很大成绩，加强快速培养方法的广泛普及已成为实验室提高阳性率 ，为结核病的早期诊断、治疗和预防提供可靠依据的重要一环。［1］
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　500 例痰标本来自2013 年1 月 ～ 2013 年 6 月我院肺结核就诊患者。初诊时取患者夜间痰、清晨痰和即时痰3 份痰标本，治疗或随访患者应按期留取2 份标本（晨痰、夜间痰）。痰标本采集方法：夜间痰& 痰检前一晚患者咳出的痰液；清晨痰&患者晨起立即清水漱口，而后咳出的第2、3 口痰液；即时痰&深呼吸后咳出的痰；采集标本的容器： 螺旋盖痰盒，容器上贴有条形码。标本的性状：多为干酪状、血痰、黏液痰。
　　1.2 痰检方法
　　实验方法首先进行抗酸染色镜检，然后进行960 培养。
　　1.2.1 涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10 mm 以上的距离；加热固定( 在5 秒钟内将玻片经过火焰加热4 次)。滴加石碳酸复红染液盖满玻片，加热至出现蒸汽后，停止加热，保持染色5 分钟。染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液。加热时勿使染色液沸腾。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。
　　自痰膜上端外缘滴加脱色剂盖满玻片，脱色1 分钟；如有必要，流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余的水。
　　滴加亚甲蓝复染液，染色30 秒钟。流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，然后沥去标本上剩余的水。待玻片干燥后镜检。一张染色合格的玻片，痰膜肉眼观为亮蓝色，无红色斑块。
　　报告方式：100 倍物镜按1+&4+ 进行分级。
　　1.3 培养采用960 分枝杆菌检测系统：痰标本视性状加入 1& 2 倍体积N a OH&N A L C 柠檬酸钠溶液，涡漩振荡器上振荡混匀大约15&30S，添加完NaOH&NALC 溶液之后，静置 15 ～ 20min。向离心管添加磷酸盐缓 冲液（pH6.8）至50ml 刻度标记，旋紧盖子。以3000r ／ m i n 低温离心 15m i n。离心分离之后，让培养基静置5m i n。然后，小心地将浮在表面的液体尽量多地倒入含有分枝杆菌消毒剂的适当容器中。加入少量（1 ～ 2ml）的P B S，混匀。将营养添加剂 GrowthSupplement 倒入杂菌抑制剂PANTA 试剂瓶中，充分溶解混匀，然后加入到MG I T7m l 液体培养管，每管0．8m l，吸取0．5m l 标本加入到MGIT7ml 液体培养管中进行培养。荧光强度记忆探测器 每隔60min 测定培养管内荧光强度，以生长指数 GI 值报告。[2]
　　2 结果
　　2.1 痰涂片镜检结果
　　半年痰涂片检查共500 例患者，其中镜检阳性标本175 份，阳性率35%；阴性标本325 份，阴性率为65%。500 份痰标本同一患者的三份痰标本涂片中，一份痰的阳性检出为75 例，占15%；两份痰的阳性检出为60 例，占12%；三份痰检出均为阳性的为40 例，占8%。
　　2.2 960 分枝杆菌培养结果
　　500份痰标本进地960分枝杆菌检测，其中培养阳性的标本有290例， 占58%。污染14 例，占2.8%。
　　3 讨论
　　结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及许多脏器， 以肺部结核感染最为常见。排菌者为其重要的传染源。因此，第一时间检测出患者痰中的分枝杆菌在结核病的控制和治疗方面起着相当重要的作用。所以分枝杆菌培养对涂阴培阳的患者的治疗方面具有决定性的意义。
　　痰涂片镜检来查找抗酸杆菌，快速、简单并且成本较低是这种方法的特点。缺点是无法辨别死菌、活菌，敏感性低，特异性差，需通过进一步实验判断分枝杆菌的类型。
　　对500 份标本进行抗酸染色，阳性率为35%，本次将一份痰的阳性检出为75 例，占15%；两份痰的阳性检出为60 例，占12%；三份痰的阳性检出为40 例，占8%；同时进行960 分枝杆菌培养阳性率为58%，由此说明患者送检三次痰可提高阳性检出率。并且960 分枝杆菌培养阳性率高于痰涂片的结果。综上可见，痰960 分枝杆菌培养明显优于涂片法。
　　由于抗酸菌染色检测方法不能区别细菌有无活性，对患者的传染性及疗效的评估作用有限，因此痰分枝杆菌培养是确定诊断和评定的金标准。［3］960 分枝杆菌培养作为发现结核病传染源及制定合理治疗方案的重要依据，在控制传染源消除结核病传播方面起着至关重要的作用。
　　参考文献
　　[1] 张涛，吕纯芳.BACTEC MGIT960 系统快速培养分枝杆菌的效果评价. 临床肺科杂志，2011 年5 月 第16 卷第5 期：717.
　　［2］谭玲玲，何振华. 临床肺科杂志，2011 年 5 月 第 16 卷第 5 期.
　　［3］朱莉贞，结核病分类法实施中存在的有关问题[ J ] . 中华结核和呼吸杂志，4-315.
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