核酸检测有几个步骤?

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在北京市疫情防控的第135场例行新闻发布会上,北京市委组织部副部长张强表示,截至6月28日12时,北京累计完成采样829.9万人,已完成检测768.7万人,基本完成“应检尽检”人员动态清零。

大量的核酸样本都被送到了什么地方?核酸检测结果又是怎么得出的?记者选取了中日友好医院的两间核酸检测实验室进行揭秘探访。

△中日友好医院临床微生物与感染实验室

N95口罩、防护服、防护手套、鞋套、一次性靴套、隔离服、第二层手套、护目镜……把这一整套防护物品穿戴好,核酸检测人员“全副武装”进入了实验室,在“负压”的状态下进行高强度的工作,捕捉核酸标本中病毒的蛛丝马迹。

在中日友好医院检验科新冠核酸检测实验室,6个小时下来,一位22岁的年轻技师一边脱去层层“束缚”,一边冲镜头笑说:“如释重负,脱掉这衣服的感觉太爽了。”年轻的脸被口罩勒得痕迹分外明显。

上午开始检测,下午或傍晚就能取到结果,日检测量最高可达人份,中日友好医院实验室的技师们几乎每天都要工作到深夜。

在北京市疫情防控“应检尽检”和“愿检尽检”的要求下,核酸检测需求量激增,每一张科学准确的核酸检测报告背后,是“病毒猎手”们的高超技艺和辛苦付出。

核酸检测实验有哪些步骤?

被送来的咽拭子或鼻咽拭子标本进入实验室,采样管外表要先用95%酒精消毒,再经水浴或者孵箱进行病毒灭活。

进入到实验室最危险的区域——样本制备区,医护人员把样本放入核酸提取仪器中进行核酸提取。在这里,他们有可能直面新冠病毒。样本制备区为负压,危险的病毒不会从这个区域释放出来。核酸提取在生物安全柜内完成加样,是整个操作中生物安全最关键的一步。

提取出来的核酸被转运至扩增区。因为个人样本里含有的核酸数量很少,经过与扩增检测试剂混合后,采用PCR仪扩增,可将特异的病毒RNA片段复制、扩增240~245倍,更容易被检测到。这也是PCR(扩增)实验室名称的由来。

检验人员通过扩增检测仪呈现的图谱,得出核酸呈阳性或阴性的结果。

△阳性质控样本,S型曲线为阳性。否则为阴性

隐藏在核酸检测实验室,“病毒猎手”默默地战斗在新冠肺炎疫情防控一线。他们面临着气溶胶传染的风险,抽丝剥茧寻找“真凶”,也消耗着巨大的体力。

“对于很多人来说,一份核酸检测阴性报告就是他的一份通行证,总得有人站出来去检测去,这个是我们的专业。只有找到隐形的杀手的时候,我们才能够对症的治疗,这是非常重要的。”中日友好医院临床微生物与感染实验室主任鲁炳怀自豪地告诉记者。

记者丨顾小慈 杨毅 靳丹妮

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我们通过核酸检测才能检测出身体内部的基因序列有没有问题,现在核酸检测的方法是pcr核酸检测,这种方法是什么意思,主要检测手段是什么,大概几天出结果。

pcr核酸检测是什么意思

PCR的意思是聚合酶链式反应,能够用来扩增DNA,从而将微量的DNA扩增到能够检测的程度。有些病毒的核酸是DNA,需要采用这个方法进行检测。所以PCR并不是进行的检查,而是检测DNA的一种方法。比如乙肝病毒DNA定量,用的就是这一种方法。检查DNA的目的,一方面是可以诊断疾病,如果连病原体的DNA都能检测到,就说明感染了这种病原体;另一方面是判断病毒复制的多少,从而判断病情严重程度或者治疗效果。

pcr核酸检测方法与步骤

进行核酸检验,需要经过取样、留样、留存、核酸提取、上机检测五个步骤。

核酸检测的第一步就是采集人体分泌物,用鼻试子或咽试子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧咽扁桃体处。

第二步医务人员进行留样,将试子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖。

第三部要将样本放入密闭袋中,保存好并及时送检。

第四步将样本送进实验室,提取核酸。

第五步,将提取物进行荧光PCR扩增反应。

pcr核酸检测要多久出结果

核酸检测操作过程需要几个小时,一般1-2天出结果。目前新冠病毒的核酸检测主要是使用RT-PCR法检测试剂盒,操作是:1、检测人员先用核酸提取试剂盒提取患者标本里的核酸。2、把提取到的核酸放进检测试剂中复制。3、结果判定。第1步和第2步都有严格的操作流程和操作条件,整体耗时在1-4小时之间,最后判定结果。医院的检测是上午统一上机,到统一出结果差不多5个小时,也就到了下午,然后统一上报,不会随到随检。所以下午或晚上所送的标本是第2天做,有的医院自己不具备实验室条件,不能做,需送到上一级实验室做,保守估计时间是1-2天。

什么是实时荧光RT-PCR

先从样本中提取出病毒的RNA。具体来说,就是在样本中加入核酸提取试剂,把病毒破坏,让核酸释放出来。

② 把病毒RNA“反转录”成cDNA

通过反转录技术(RT),把病毒的RNA“反转”成一种特异DNA,即cDNA(因为病毒RNA结构不稳定,所以把病毒RNA转换成稳定的cDNA会更方便检测)

这里会用到核酸检测试剂盒中一种叫“反转录酶”的物质。而完成转录后,所有工作都将围绕cDNA展开。

③ 进行cDNA的扩增与检测

简单说就是扩增cDNA的数量。这里应用的就是PCR,全称聚合酶链式反应。具体来说,就是借助试剂盒中一些特殊物质,让cDNA不断复制,使其数量呈指数式增长。

当cDNA扩增的同时,试剂盒中还有一种叫荧光探针的东西同时工作。它会释放荧光信号,cDNA每完成一次扩增,荧光信号就会增加一点,而PCR检测仪就能记录到一个荧光信号增加的Ct值。

这一步就是根据检测仪记录的Ct值,进行检测结果分析。

理想状态下,如果样本中有新冠病毒,那么在cDNA完成预订次数的扩增后,检测仪记录的Ct值就会形成一个逐渐上升的S形曲线,检测结果为阳性;如果没有类似的S型曲线,检测结果就为阴性。

做完以上所有工作,通常需要4~6小时。

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