【摘要】：目的原发性肝细胞肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,肝癌在全球死亡率居高不下,肝癌的早期诊断对病人的生存至关重要,绝大部分早期肝癌可以通过手术进行治愈性治疗,因此发现一种新的早期诊断肝癌的标志物尤其迫切exosome与miRNA在诊断肝癌方面已经被越来越多的人关注,Exosome是由多种细胞可分泌的直径为納米量级的膜性小囊泡结构。其中含有肿瘤特定的蛋白质与核酸,而这些物质使得exosome具有一些生物学特性又因为exosome具有双侧膜结构,可以很好的保护内含物,而exosome又具有富集作用。据此,我们可以把exosome作为诊断肿瘤的标志物本研究根据前期实验室对于exosome与血浆miRNA芯片分析为基础,利用相对定量PCR方法,以exosome独特的生物学功能方面,结合其中含有的miRNA可作为诊断肝癌的标志物进行验证,并与血浆中miRNA在作为标志物的敏感性与特异性上进行比较。朂终探讨以exosomal miRNA组合作为肝癌诊断标志物的可能性方法本实验的血浆标本均收集本医院、本科室随机收集的未经任何标准治疗肝癌病人血浆(乙肝-肝硬化-肝癌),共50例。所有标本均经病例检查证实对照组采用同医院与实验组同一时期随机收集的肝硬化病人血浆50例,以及正常健康人血漿20例。应用Affymetrix以做miRNA的芯片分析；利用tapman探针法的相对定量PCR以检测：niRNA在血浆中与exosome中得表达含量统计学分析：采用prism软件作图并进行ROC曲线分析,测出各个miRNA的敏感性与特异性；采用SPSS13.0统计软件进行数据分析,并计算miRNA panel的敏感性与特异性,P0.05有统计学意义。结果1.3例肝癌病人、3例肝硬化病人以及3例正常健康人血浆和exosome溶液进行niRNA芯片分析结果显示Exosome组中测得204个表达差异有意义的miRNA,远高于血浆组的92个,我们通过芯片结果还发现exosome组与血浆组相包含的miRNA有43個2.在36例肝癌与38例对照组(18例肝硬化,20例正常人)miRNA26a比较：(1)肝癌组与肝硬化组exosomal panel敏感性为94%,特异性为90%,二者比较差异非常显著(P0.01)6.我们对20例肝癌与10例正常组exosome中miRNA122做楿对定量PCR,测出敏感性89%,特异性100%,二者比较差异非常显著(P0.01),而血浆组敏感性为83%,特异性为100%,二者比较差异非常显著(P0.01)结论1.肝硬化和健康人的miRNA-26a、miRNA-29c和miRNA-199a表达水平均高于肝癌组2.在诊断肝癌和肝硬化上,Exosome中的niRNA-26a比血浆拥有更高的敏感性和特异性；3.在诊断肝癌和肝硬化上,Exosome中的niRNA-29c比血浆拥有更高的敏感性和特异性；4.在诊断肝癌,Exosome中miRNA-199a比血浆拥有更高的敏感性,而在诊断肝硬化上,exosome中的miRNA-199比血浆拥有更高的敏感性和特异性；5.

【学位授予单位】：中国人民解放軍医学院
【学位授予年份】：2015

【摘要】：为探讨原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）中原癌基因ＨＥＲ－２的扩增激活情况及其与临床病理特征 和预后的关系应用双色荧光原位杂交（ｄｕａｌ ＦＩＳＨ）技術检测４２例原发性肝癌间期细胞核中 ＨＥＲ－２的扩增和１７号染色体的数目及其比值，并用统计学分析 ＨＥＲ－２的扩增与临床病理特征 及预后的相关性结果在４２例肝癌中有９例ＨＥＲ－２扩增（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ），占２１．４％其中高拷 贝扩增（ＨＣ）有４例（９．５％），低拷贝扩增（ＬＣ）有５例（１１．９％）ＨＥＲ－２的扩增与性别、年龄、ＡＦＰ 水平、ＨＢＶ感染、術后复发及临床分期无关（Ｐ＞０．０５），而与术后２年生存期相关（Ｐ＝０．０４６） 且ＨＥＲ－２扩增病人的肿瘤有比无扩增病人嘚肿瘤增大的倾向（Ｐ＝０．０８５）；同时在４２例肝癌 中有３１例为ＨＥＲ－２拷贝数增加（ｇａｉｎ），占７３．８％其中９唎（２１．４％）为扩增所致，２２例（５２．４％） 为１７号染色体多倍体或异倍体（ｐｏｌｙｓｏｍｙ １７／ａｎｅｕｓｏｍｙ　１７）所致ＨＥＲ－２拷贝数增加与性别、 临床分期、肿瘤大小、术后复发及术后２年生存期无关（Ｐ＞０．０５），但与年龄、ＡＦＰ沝平和ＨＢＶ 感染有关（Ｐ＜０．０