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二、临床常用感染指标检测的意义 血WBC+N分类 血清CRP 血沉 PCT降钙素原 内毒素鲎试验 血液标本真菌抗体测定 细菌耐药性检查 结核分支杆菌实验室检查 病毒性肝炎标志物检测 白细胞检测 白细胞计数 WBC
白细胞分类计数 粒细胞 中性、嗜酸性、嗜碱性） 淋巴细胞 单核细胞 白细胞计数 WBC
概念：测定血液中各种白细胞的总数（WBC*109/L）
4～10x109/L 儿童：
5～12x109/L 新生儿：15～20x10 9/L
白细胞增多： WBC
白细胞减少： WBC
白细胞分类计数
中性粒细胞异常 中性粒细胞增多 中性粒细胞减少 中性粒细胞的核象变化 中性粒细胞的毒性变异 中性粒细胞增多
是白细胞增多的主要原因,见于： 化脓性感染 严重的组织损伤 急性中毒 急性大出血 血液病及肿瘤 某些寄生虫感染 生理性：新生儿、妊娠、剧烈运动、饱餐 中性粒细胞减少 某些细菌、病毒感染：流感、麻疹、伤寒、登革热等 造血功能异常：再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症、白细胞不增多性白血病 药物及理化因素的作用：化疗、放疗 自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮 脾功能亢进 中性粒细胞核象变化 核左移:周围血中杆状核粒细胞增多 5%并可出现更幼稚的粒细胞. 临床意义：骨髓造血功能旺盛，释放功能良好。常见于各种病原体感染、大出血、大面积烧伤、大手术、恶性肿瘤晚期等 核右移:若分5叶者超过3%；或中性粒细胞分叶过多，大部分为4～5叶或更多.临床意义：骨髓造血功能减退或缺乏造血物质。常见于巨幼细胞贫血、恶性贫血、化疗之后 中性粒细胞的毒性变异 中毒颗粒：严重化脓性感染、大面积烧伤等在N胞浆中出现的大小不等、分布不均、染色较深的紫红色颗粒。 空泡变性：见于严重感染特别是败血症
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【doc】K-B纸片琼脂扩散法检测细菌药物敏感试验的影响因素分析
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54《微生物学检验》复习思考题参考答案(1)-4
7、填空题；⑴F-菌亦称，可经方式变为F+菌；⑵R质粒可通过、和等基因转移和重组的方式在细菌间；药性，其中最主要的方式为；⑶通常把细菌的鞭毛从有到无的变异，称为变异，把细；等作用而致细胞壁缺陷称为变异；⑴雌菌，接合；⑵转化，接合，转导，接合；⑶H-O，细菌L型；细菌的感染与免疫；⑴侵袭力：致病菌能突破宿主皮肤、粘膜生理屏障等免；和扩散的能力；⑵毒血症是指致病
7、填空题⑴ F-菌亦称
方式变为F+菌。⑵ R质粒可通过
等基因转移和重组的方式在细菌间传递耐药性，其中最主要的方式为
。⑶ 通常把细菌的鞭毛从有到无的变异，称为
变异，把细菌因受青霉素、免疫血清等作用而致细胞壁缺陷称为
变异。⑴ 雌菌，接合⑵ 转化，接合，转导，接合⑶ H-O，细菌L型 细菌的感染与免疫 1⑴ 侵袭力：致病菌能突破宿主皮肤、粘膜生理屏障等免疫防御机制，进入机体定居、繁殖和扩散的能力。⑵ 毒血症是指致病菌侵入宿主机体后，只在机体局部生长繁殖，病菌不进入血循环，但其产生的外毒素入血。外毒素经血到达特定的靶器官和组织，引起特征性的毒性症状。例如白喉、破伤风等。⑶ 脓毒血症是指化脓性细菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散到机体其他组织器官，产生新的化脓性病灶。例如金黄色葡萄球菌（S. aureus）引起肝脓肿、肾脓肿、肺脓肿。⑷ 败血症是指病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物（包括内毒素和外毒素等）所引起严重的全身性中毒症状。例如高热、皮肤和粘膜瘀斑、肝脾肿大等。⑸ 菌血症是指病原菌由局部入血，一过性从血流到达易感部位后再行繁殖而致病，例如伤寒早期有菌血症。⑹ 外源性感染：病原菌来源于宿主体外的感染。 ⑺ 内源性感染：病原菌来自病人自身的体内或体表。多数由正常菌群引起；少数是以潜伏状态存在于体内的致病菌引起，如结核分枝杆菌、HSV、CMV。 ① 侵入体内的微生物（细菌）的数量 侵袭力：菌体表面结构与侵袭性酶等② 侵入体内的微生物（细菌）的毒力毒素：内、外毒素③ 侵入途径：呼吸道、消化道、皮肤（创伤）、血液、人畜共患病的传播（节支动物媒介传播）、性接触等④ 机体免疫力区别点⑴来源⑵存在部位⑶化学成分 外毒素 内毒素 G+菌和部分G-菌 G-菌 从活菌分泌出，少数菌崩解后释出 Cell wall成分，菌裂解后释出 蛋白质，分子结构为A-B模式 脂多糖⑷稳定性⑸毒性作用⑹抗原性 60-80℃，30min被破坏 强，对组织器官有选择性毒害效应，可分为神经毒素、细胞毒素和肠毒素三大类，引起特殊临床表现 强，刺激机体产生抗毒素；甲醛液处理脱毒形成类毒素 160℃，2-4h才被破坏 较弱，各菌的毒性效应大致相同，引起发热、白细胞增多、微循环障碍、休克、DIC等。 弱，刺激机体产生的中和抗体作用弱；甲醛液处理不形成类毒素 4、简述细菌性感染的类型有哪些？全身细菌性感染类型有哪些？细菌性感染的类型有：⑴ 根据临床症状可分为：隐性感染、显性感染、。其中显性感染又可根据病情缓急分急性感染、慢性感染；⑵ 根据感染部位分：局部感染和全身感染，其中全身感染又可分为毒血症、内毒素血症、菌血症、败血症和脓毒血症。 5、病原菌标本的采集与送检要注意什么？采集细菌标本的一般原则是：⑴ 无菌操作。避免杂菌污染标本；⑵ 因时取材。根据疾病特点采集不同标本（不同病期取不同标本）；在采取局部病变标本处，不可用消毒剂；⑶ 尽早取材。在使用抗生素之前采集，对已用抗菌药患者的标本，应注明药物名称； ⑷ 因地取材。尽可能采集病变明显部位的材料；⑸ 标本必须新鲜。采集后尽快送检（多数细菌标本可冷藏保存或运送）。【附】病毒性疾病标本的采集与送检方法原则基本，病毒感染性疾病实验室诊断标本采取基本原则与细菌相似，即：早期采样，冷藏速送。但还要特别注意下列原则：⑴ 被杂菌或易受污染的标本，在进行分离培养时应该使用抗生素（加入高浓度青霉素、链霉素或庆大霉素处理）；⑵ 标本的运输和保存：若标本采集地点离病毒实验室较远，可将标本置甘油缓冲盐水中低温保存送检；⑶ 进行病毒血清学诊断时，应采取双份血清即在发病初期和病后2-3w内各取一份血清，以对比抗体效价变化。 6、填空题⑴ 感染的后果与病原菌本身的
密切相关。⑵ 细菌的毒力由
构成。⑶ 内毒素主要是
菌细胞壁中的
成分。其他微生物如
中亦存在类似物质。⑷ 内毒素引起发热的机制是作用于机体的
细胞，使之产生具有
的细胞因子。 ⑸ 因为外毒素的化学成分是
，所以可用
处理制备成
用于预防疾病。 ⑹ 根据外毒素的作用机制不同，可将其分为
三类。 ⑺ 多数外毒素的分子结构由
亚单位组成，其功能前者是
，二者缺一既无致病作用。⑴ 毒力
侵入部位⑵ 侵袭力
毒素⑶ 革兰阴性
脂多糖（LPS）
立克次体⑷ 巨噬
内源性致热原⑸ 蛋白质
类毒素⑹ 神经毒素
肠毒素⑺ A
B毒素活性部分（决定毒性效应）与特殊受体结合（介导毒素进人靶细胞）细菌对抗菌药物的敏感试验 1、简述抗菌药物敏感性试验 （AST）的意义。① 可预测抗菌治疗的效果。即AST试验结果为 D敏感‖时，治疗可能有效； 试验结果为D耐药‖ 时，使用该药物治疗大多失败。② 指导医生合理使用抗菌药物（提供所选择药物的依据）。AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为D敏感‖该治疗为有效，若结果为D耐药‖，即应更换药物。③ 监测常见病原菌的耐药状况并将结果定期通报临床，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。④ 评价新抗菌药物的抗菌谱及抗菌活性等药效学指标。 2、简述常规药敏试验抗菌药物选择原则。选择原则应考虑到药物临床疗效、耐药菌株流行情况、预防耐药菌株产生和经济等综合因素，最终目的是达到控制感染病。目前，我国主要遵循美国NCCLS（National committee for clinical laboratory standards ,NCCLS）制定的抗菌药物敏感性试验执行标准。在标准中分成A、B、C 、U四组：A组（所列的抗生素）为首选药敏试验并常规报告的抗菌药物（简称：首选/一级试验并常规报告的抗菌药物即：常规首选药物）。B组为临床使用主要抗生素,尤其在医院感染时使用的抗生素（简称：一级 / 首选试验并选择报告的抗菌药物）。该类抗生素可在下列情况下使用：①对A组同类抗生素耐药；②标本来源不同时，如三代头孢菌素使用于脑脊液中的肠杆菌，磺胺甲恶唑使用于尿道分离的细菌；③多种微生物感染；④多部位感染；⑤感染流行的控制；⑥对A组抗生素过敏、耐受或无反应。C组药物用于对A组药物耐药的流行菌株或对A组药物过敏的病人和某些不常见的细菌（如肠外分离的沙门菌属或耐万古霉素肠球菌）。即：C组为补充实验，有选择报告的抗微生物药物。U组仅用于尿道中分离的细菌，不作为尿道外分离菌的常规药敏试验。即： U组仅用于泌尿道的补充实验的抗微生物药物。 3、药物敏感试验（AST）结果如何解释？简述常用的药物敏感试验（AST）方法有哪些？不论是抑菌圈的量取或MIC、IC值的读取，根NCCLS标准，药物敏感试验（AST）结果最终以D敏感‖、 D耐药‖和D中介‖报告。常用的药敏试验方法包括纸片扩散法（K-B法）、稀释法、抗菌药物梯度法（E-test）和自动化仪器法。 4、简述纸片琼脂扩散药敏试验（K-B法）的原理、方法、结果判断和报告。原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内，测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。实验方法：接种―贴放药物纸片―培养用无菌棉拭子蘸取已制备好的菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，均匀涂布于M-H琼脂表面，涂布3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹一周（沾菌棉拭子用后，放入消毒缸中，勿乱丢）。盖上平皿盖，在室温下干燥3～5分钟后，用无菌镊子将药敏纸片贴于琼脂表面，用镊子尖压一下，使其贴牢（纸片贴上就不再移动，因为有些药物已扩散到琼脂内；贴纸片要求：纸片距平板内缘应大于15mm，各纸片中心相距应大于24mm。直径为90mm的平板可贴6张纸片）。置35℃温箱培养16～18小时后读取结果。结果判断和报告：用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据NCCLS标准，作出D敏感‖、D耐药‖和D中介‖的判断。【附】接种菌液的准备：①直接调制法：用接种环挑取琼脂平板上形态相同的菌落4~5个，置于无菌3~5ml生理盐水或MH肉汤管中，校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×108cfu/ml的含菌量）。校正后的菌液应在15分钟内接种。②生长法：用接种环挑取琼脂平板上形态相同的菌落4~5个，接种于3~5mlMH肉汤管，35℃培养4h。再用生理盐水或MH肉汤校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准。体外联合药物敏感试验的意义：⑴ 扩大抗菌谱，治疗混合性感染；⑵ 预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生；⑶ 联合用药可以减少剂量，以避免达到毒性剂量；⑷ 对某些耐药细菌引起的严重感染，联合用药比单一用药时效果更好。抗菌药物联合用药可出现4种结果：⑴ 无关作用：两种抗菌药物联合作用的活 性等于其单独活性；⑵ 拮抗作用：两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性；⑶ 累加作用：两种药物联合作用时的活性等于两种单独抗菌活性之和；⑷ 协同作用：两种药物联合作用显著大于其单独作用的总和。 6、名词解释折点药物敏感试验：仅用特定抗生素浓度（敏感、中介或耐药折点MIC）而不使用测定MIC时所用系列对倍抗生素浓度测试细菌对药物的敏感性称折点敏感试验。当选择区分中介和耐药折点值药物浓度时，若两种抗药物浓度培养基均生长可判断为耐药；如在两种药物浓度均不生长则为敏感；仅在较低药物浓度培养基中生长提示为中介。超广谱β-内酰胺酶就是能水解青霉素、广谱头孢菌素及单胺类的酶，主要由克雷伯菌和大肠埃希菌、肠杆菌等细菌产生。临床意义 ：产ESBL克雷伯菌和大肠埃希菌不论其体外药物敏感试验结果如何，对青霉素类、头孢菌素类和单环类（氨曲南）耐药（治疗无效）。 但对头霉素、碳青霉稀及β-内酰胺酶抑制复合制剂可能敏感。耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)：1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10mm，或其MIC≥4μg／ml的金黄色葡萄球菌。对1μg苯唑西林抑菌圈直径≤ 17mm，或MIC ≥ 0.5μg／ml的凝固酶阴性葡萄球菌称耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。临床意义 ：MRS不论其体外药敏试验结果，所有的β－内酰胺类药物和β－内酰胺／β－内酰胺酶抑制剂均无临床疗效；绝大多数的MRS常示多重耐药，包括氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类。
当对1 μg／ml苯唑西林纸片抑菌圈＜20mm或MIC＞0.06 μg／ml应视为耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）。临床意义:PRSP对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢克肟、头孢唑肟，临床治疗的疗效很低。但应检测对头孢曲松、头孢噻肟和美咯培南的MIC以判断是否对这些抗生素敏感。对 30μg万古霉素纸片抑菌圈直径 ≤14mm或 MIC≥32μg／ml应视为耐万古霉素肠球菌（VRE）。临床意义 :耐万古霉素肠球菌目前尚无有效治疗方法，但对青霉素敏感的VRE可用青霉素和庆大霉素联合治疗，若对青霉素耐药而不是高水平耐氨基糖苷类可用替考拉宁＋庆大霉素。肠球菌对 120μg庆大霉素纸片抑菌圈直径 ≤6mm或 MIC≥500μg／ml时；对 300μg链霉素纸片抑菌圈直径 ≤6mm或 MIC≥1000μg／ml（肉汤）或MIC＞2000 μg／ml（琼脂）时，被称为氨基糖苷类高水平耐药（HLAR）肠球菌。临床意义:HLAR菌株，青霉素和氨基糖苷类药物联合治疗无效，须使用万古霉素。对万古霉素耐药的菌株，治疗比较困难，没有特定的规律，可供选择的有四环素、氯霉素、喹诺酮类，泌尿系可考虑呋喃妥因或磺胺类。 病原性球菌及检验 1O试验。⑴ β-溶血（β-hemolysis）/乙型溶血：有些细菌在血琼脂平板生长繁殖，在菌落周围可形成一个2～4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环。此种溶血环称为β-溶血。 ⑵ α-溶血（α-hemolysis）：有些细菌在血琼脂平板生长繁殖，在菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，溶血环中的红细胞未完全溶解。此种溶血环称为α溶血（甲型溶血）。包含各类专业文献、专业论文、各类资格考试、高等教育、生活休闲娱乐、外语学习资料、中学教育、54《微生物学检验》复习思考题参考答案(1)等内容。　
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简述K-B纸片琼脂扩散法原理及影晌因素。
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K-B纸片琼脂扩散法原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
影响纸片法药敏试验结果的因素有:1培养基的质量,如pH、深度、硬度和表面湿度等。对每批商品化或自配MH琼脂必须用标准质控菌株进行检测,合格后方能使用;2药敏纸片的质量,含药量和保存方式;3接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一,取决于麦氏比浊标准的配制,正确使用和保存;4试验操作质量;5孵育条件,温度和时间;6抑菌圈测量工具的精度;7质控标准菌株本身的药敏特性是否合格,有无变异。}